三种人参属药用植物荧光原位杂交技术及核型分析

发布时间：2023-04-09 21:59

　　人参(Panax ginseng C.A.Mey)、西洋参(P.quinquefolius L.)、三七(P.notoginseng(Burk.)F.H.chen)三种是人参属代表性药用植物,具有较高的药用价值和经济价值,受到研究学者的高度重视。然而,目前有关三者的研究工作多集中在栽培、生理、药理药化等方面,而对其遗传特性方面的研究相对较少,从而制约了一些分子生物技术在人参属药用植物中的应用。本文以三种人参属药用植物不同分生组织为试材,优化了各物种材料的染色体制片技术,以PCR法筛选到的rDNA序列为探针,对三种人参属药用植物进行双色荧光原位杂交,并分析其核型和亲缘关系。主要研究结果如下:1.通过对人参属药用植物不同材料染色体制片的影响因素进行对比研究,优化了不同材料染色体制片技术。结果表明:染色体制片取材是关键,组培苗根尖长至2cm,种子根尖长至1.5cm,参苗根尖长至1cm,愈伤组织继代后6-9d时,取材适宜。三种根尖经0℃冰水预处理10-15h或2mmol/L 8-羟基喹啉预处理2-6h,染色体形态清晰,愈伤组织0℃放置24h,染色体聚缩程度适中。37℃水浴条件下,组培苗根尖和参...

【文章页数】：73 页

【学位级别】：硕士

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摘要
abstract
英文缩略表
第一章 引言
    1.1 人参属药用植物染色体核型及亲缘关系研究概况
    1.2 荧光原位杂交技术
        1.2.1 植物靶DNA制片
        1.2.2 探针类型和标记
    1.3 荧光原位杂交衍生技术
        1.3.1 多色荧光原位杂交
        1.3.2 基因组原位杂交
        1.3.3 比较基因组原位杂交
        1.3.4 细菌或酵母人工染色体荧光原位杂交技术
        1.3.5 三维荧光原位杂交技术
        1.3.6 原位PCR
    1.4 荧光原位杂交在人参属药用植物中的研究应用
        1.4.1 基因定位检测
        1.4.2 染色体核型分析
        1.4.3 远缘杂种及外源染色体检测
        1.4.4 种间亲缘关系研究
        1.4.5 多倍体起源与进化研究中的应用
    1.5 研究内容及目的意义
        1.5.1 研究内容
        1.5.2 研究目的及意义
第二章 人参属药用植物染色体制片技术优化
    2.1 试验材料
    2.2 试验仪器与试剂
        2.2.1 主要试验仪器
        2.2.2 试验试剂
    2.3 试验方法
        2.3.1 取材
        2.3.2 预处理
        2.3.3 解离
        2.3.4 染色
        2.3.5 制片
    2.4 结果与分析
        2.4.1 取材时间
        2.4.2 预处理时间
        2.4.3 解离时间
        2.4.4 染色方法
        2.4.5 制片方法
    2.5 讨论
第三章 人参属药用植物rDNA筛选与重组克隆
    3.1 试验材料
    3.2 试验仪器及试剂
        3.2.1 主要试验仪器
        3.2.2 试验试剂
    3.3 试验方法
        3.3.1 DNA提取
        3.3.2 rDNA扩增
        3.3.3 rDNA回收
        3.3.4 rDNA重组克隆
        3.3.5 阳性克隆检测
    3.4 结果与分析
        3.4.1 DNA提取结果
        3.4.2 rDNA扩增
        3.4.3 rDNA回收
        3.4.4 rDNA重组克隆及阳性克隆检测
    3.5 讨论
第四章 荧光原位杂交及核型分析
    4.1 试验材料
    4.2 试验仪器及试剂
        4.2.1 主要试验仪器
        4.2.2 试验试剂
    4.3 试验方法
        4.3.1 质粒提取
        4.3.2 探针标记
        4.3.3 原位杂交
        4.3.4 洗片、镜检
        4.3.5 核型分析
    4.4 结果与分析
        4.4.1 人参属药用植物各探针原位杂交结果
        4.4.2 人参染色体核型分析
        4.4.3 西洋参染色体核型分析
        4.4.4 三七染色体核型分析
        4.4.5 核型似近系数聚类分析
    4.5 讨论
第五章 结论
参考文献
附录
    附录一：rDNA回收测序结果
    附录二：试验试剂配方
致谢
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本文编号：3787806