耐盐相关的陆地棉VP基因家族分析及GhVP1基因的功能验证

发布时间：2023-05-07 13:20

　　棉花是我国天然纤维的重要来源之一,同时也是作为盐碱地改良的先锋作物。从分子生物学水平开展棉花耐盐机理的研究,利用基因工程手段快速提高棉花品种的耐盐性,对于充分利用我国大面积的盐碱地资源以及解决粮棉争地问题有着重要的作用。质子泵焦磷酸水解酶(VP)是生物体内一种重要的质子泵,能够水解焦磷酸释放能量,在调节细胞膨压,膜内外电势差以及胞内小分子的主动运输过程中发挥重要的作用。植物在受到盐胁迫作用时,VP能够为液泡提供能量积累无机离子和其他溶质,提高植物的耐盐性。本研究参考AD基因组数据,对陆地棉VP基因家族进行了鉴定分析。利用陆地棉材料中9807,成功克隆GhVP1基因,并结合RNAi技术和VIGS技术,成功构建干扰载体和VIGS载体,对GhVP1基因的功能展开分析,主要研究结果如下:1.比较系统地分析了陆地棉AD基因组VP基因家族。以GhVP基因(Gene Bank No.:ADN96173.1)为参考序列,参考棉花四倍体(AD组)基因组信息,筛选鉴定获得13个VP基因家族成员(GhVP1-GhVP13)。分析表明,长期进化过程里,不同物种间基因结构有一定的变化,但相同物种间仍保留大部分结...

【文章页数】：52 页

【学位级别】：硕士

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摘要
abstract
第一章 引言
    1.1 棉花耐盐方面的研究
        1.1.1 耐盐性研究的重要性
        1.1.2 盐胁迫对棉花的影响
        1.1.3 棉花耐盐基因研究
    1.2 VP基因的研究进展
    1.3 VIGS研究进展
        1.3.1 VIGS技术原理
        1.3.2 VIGS载体的构建
        1.3.3 VIGS的效率和应用
    1.4 RNAi研究进展
        1.4.1 RNAi作用机制及特点
        1.4.2 RNAi技术应用
    1.5 植物转基因技术
        1.5.1 转基因技术和方法
        1.5.2 棉花转基因现状
    1.6 立题依据
第二章 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 供试材料
        2.1.2 实验菌株与载体质粒
        2.1.3 引物、酶、与试剂盒
        2.1.4 培养基、抗生素的配制
    2.2 试验方法
        2.2.1 材料处理方法
        2.2.2 陆地棉VP基因家族分析
        2.2.3 GhVP基因目的片段的获得
        2.2.4 RNAi载体的构建
        2.2.5 VIGS载体的构建
        2.2.6 RNAi载体花絮法转化拟南芥
        2.2.7 VIGS载体浸染棉花
        2.2.8 RNA的提取
    2.3 转GhVP1基因棉花的检测
        2.3.1 DNA的提取
        2.3.2 转基因分子检测
第三章 结果与分析
    3.1 VP基因家族的全基因组鉴定和分析
        3.1.1 GhVP基因家族成员的鉴定
        3.1.2 VP基因家族蛋白结构域和motif分析
        3.1.3 GhVP基因家族的基因结构分析
        3.1.4 VP基因家族的进化分析
    3.2 GhVP的功能分析
        3.2.1 GhVP在拟南芥中的功能分析
        3.2.2 GhVP在棉花中的功能分析
    3.3 转GhVP1基因棉花分子检测
第四章 讨论
    4.1 陆地棉VP基因家族的讨论
    4.2 VP基因的讨论
    4.3 棉花转基因检测
第五章 全文结论
参考文献
致谢
作者简历



本文编号：3810648