分离自冬虫夏草子实体菌株的特性研究
发布时间：2023-05-20 02:48
本文首先对冬虫夏草的基本情况进行了概述,然后从冬虫夏草菌的生物学特性、无性型的研究以及冬虫夏草相关菌的研究进行了重点综述。针对冬虫夏草菌一直未实现科赫氏法则的完整验证而存在争议,本实验希望通过对冬虫夏草上菌株的特性研究,为解决这一问题提供有益探索。以新鲜冬虫夏草子实体部分为实验材料,进行组织分离和子囊孢子分离,获取冬虫夏草上的真菌菌株,并对其进行了分类鉴定,对新发现的菌株进行了基本的生物学特性,其与中国被毛孢之间的关系,以及对寄主蝙蝠蛾幼虫的侵染率进行了研究,本实验主要取得了以下研究成果:1.发明了一种简单高效实用的冬虫夏草子囊孢子分离方法—光斑标记法。2.组织分离得到了中国被毛孢菌株若干株,子囊孢子单孢分离菌株115株。3.分离鉴定了5株中国被毛孢以外的新菌株,其中TB-1为产黄青霉Penicillium chrysogenum;TB-3和TB-4为枝孢菌Cladosporium sp.、FD为镰刀菌Fusarium sp.、MR-1可能是一未知新种。4.对5株真菌进行基本生物学特性研究,确定了其最适温度、pH、碳源、氮源。5.确定了5株真菌与中国被毛孢的相关关系,5株供试菌株均能通...
【文章页数】：95 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
1 绪论
1.1 冬虫夏草的概述
1.1.1 形态特征与生活史
1.1.2 资源与分布
1.1.3 化学成分和药理作用
1.1.4 人工开发与应用
1.2 冬虫夏草菌的生物学特性
1.2.1 菌落培养特征
1.2.2 菌丝显微特征
1.2.3 分离方法
1.3 冬虫夏草无性型的研究
1.3.1 冬虫夏草无性型的确证
1.3.2 冬虫夏草菌无性型的争议
1.4 冬虫夏草相关菌的研究
1.4.1 相关菌的提出
1.4.2 相关菌与中国被毛孢的关系
1.4.3 ITS序列在真菌鉴定中的应用
1.5 本研究的目的与意义
2 材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 供试冬虫夏草(Cordyceps sinensis)
2.1.2 供试蝙蝠蛾幼虫
2.1.3 实验仪器
2.1.4 实验试剂
2.1.5 相关培养基和溶液
2.2 实验方法
2.2.1 冬虫夏草子实体的组织分离、纯化与培养
2.2.2 冬虫夏草子囊孢子单孢菌株的光斑法分离
2.2.3 DNA的提取和检测
2.2.4 ITS序列扩增反应及DNA测序
2.2.5 生物学特性研究
2.2.6 分离菌株与中国被毛孢相互作用研究
2.2.7 分离菌株侵染冬虫夏草寄主蝙蝠蛾幼虫试验
2.2.8 数据处理
3 结果与分析
3.1 菌株的分离
3.1.1 中国被毛孢的组织分离、纯化和培育
3.1.2子囊孢子的萌发培养实验
3.1.3 中国被毛孢形态子囊孢子单孢菌株的光斑法分离
3.1.4 中国被毛孢形态以外真菌菌株的分离
3.2 分离菌株的形态学描述
3.3 分子鉴定
3.3.1 分离菌株基因组DNA的电泳检测
3.3.2 分离菌株PCR产物的电泳检测
3.3.3 序列比对结果
3.3.4 系统发育树分析
3.4 生物学特性
3.4.1 温度对菌丝生长的影响
3.4.2 pH对菌丝生长的影响
3.4.3 碳源对菌株生长的影响
3.4.4 氮源对菌株生长的影响
3.5 供试菌株与中国被毛孢相关关系研究
3.5.1 对峙培养实验
3.5.2 供试菌株与供试中国被毛孢ITS序列相似度比较分析
3.6 蝙蝠蛾幼虫回接侵染实验
3.6.1 MR-1 侵染蝙蝠蛾幼虫
3.6.2 TB-3 侵染蝙蝠蛾幼虫
3.6.3 TB-4 菌株侵染蝙蝠蛾幼虫
3.6.4 TB-1 菌株侵染蝙蝠蛾幼虫
3.6.5 FD菌株侵染蝙蝠蛾幼虫
4 讨论
4.1 中国被毛孢基因组DNA提取和ITS片段扩增中的问题
4.2 中国被毛孢菌落形态多样性的问题
4.3 温度实验中温度范围的选择问题
4.4 对峙实验中存在的问题
4.5 侵染实验中存在的问题
5 结论
致谢
参考文献
附录 :测序结果
攻读学位期间研究成果
本文编号：3820389
【文章页数】：95 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
1 绪论
1.1 冬虫夏草的概述
1.1.1 形态特征与生活史
1.1.2 资源与分布
1.1.3 化学成分和药理作用
1.1.4 人工开发与应用
1.2 冬虫夏草菌的生物学特性
1.2.1 菌落培养特征
1.2.2 菌丝显微特征
1.2.3 分离方法
1.3 冬虫夏草无性型的研究
1.3.1 冬虫夏草无性型的确证
1.3.2 冬虫夏草菌无性型的争议
1.4 冬虫夏草相关菌的研究
1.4.1 相关菌的提出
1.4.2 相关菌与中国被毛孢的关系
1.4.3 ITS序列在真菌鉴定中的应用
1.5 本研究的目的与意义
2 材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 供试冬虫夏草(Cordyceps sinensis)
2.1.2 供试蝙蝠蛾幼虫
2.1.3 实验仪器
2.1.4 实验试剂
2.1.5 相关培养基和溶液
2.2 实验方法
2.2.1 冬虫夏草子实体的组织分离、纯化与培养
2.2.2 冬虫夏草子囊孢子单孢菌株的光斑法分离
2.2.3 DNA的提取和检测
2.2.4 ITS序列扩增反应及DNA测序
2.2.5 生物学特性研究
2.2.6 分离菌株与中国被毛孢相互作用研究
2.2.7 分离菌株侵染冬虫夏草寄主蝙蝠蛾幼虫试验
2.2.8 数据处理
3 结果与分析
3.1 菌株的分离
3.1.1 中国被毛孢的组织分离、纯化和培育
3.1.2子囊孢子的萌发培养实验
3.1.3 中国被毛孢形态子囊孢子单孢菌株的光斑法分离
3.1.4 中国被毛孢形态以外真菌菌株的分离
3.2 分离菌株的形态学描述
3.3 分子鉴定
3.3.1 分离菌株基因组DNA的电泳检测
3.3.2 分离菌株PCR产物的电泳检测
3.3.3 序列比对结果
3.3.4 系统发育树分析
3.4 生物学特性
3.4.1 温度对菌丝生长的影响
3.4.2 pH对菌丝生长的影响
3.4.3 碳源对菌株生长的影响
3.4.4 氮源对菌株生长的影响
3.5 供试菌株与中国被毛孢相关关系研究
3.5.1 对峙培养实验
3.5.2 供试菌株与供试中国被毛孢ITS序列相似度比较分析
3.6 蝙蝠蛾幼虫回接侵染实验
3.6.1 MR-1 侵染蝙蝠蛾幼虫
3.6.2 TB-3 侵染蝙蝠蛾幼虫
3.6.3 TB-4 菌株侵染蝙蝠蛾幼虫
3.6.4 TB-1 菌株侵染蝙蝠蛾幼虫
3.6.5 FD菌株侵染蝙蝠蛾幼虫
4 讨论
4.1 中国被毛孢基因组DNA提取和ITS片段扩增中的问题
4.2 中国被毛孢菌落形态多样性的问题
4.3 温度实验中温度范围的选择问题
4.4 对峙实验中存在的问题
4.5 侵染实验中存在的问题
5 结论
致谢
参考文献
附录 :测序结果
攻读学位期间研究成果
本文编号：3820389
本文链接：https://www.wllwen.com/nykjlw/nzwlw/3820389.html
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