水稻愈伤组织诱导过程中生长素通路的研究

发布时间：2024-02-03 06:47

　　水稻作为单子叶模式植物,是少数实现成熟组织培养的作物之一,但是对其组织培养过程中的生理过程和具体分子机制仍然知之甚少。对拟南芥愈伤组织诱导的研究发现,生长素通路中的IAA基因家族与ARF基因家族,以及被ARF转录因子激活转录的LBD基因家族这三者形成的调控机制,对愈伤组织的诱导起着重要的作用。本文的研究发现,水稻中存在类似的调控机制,在水稻种子的愈伤组织诱导过程发挥着重要的作用。本研究通过构建了水稻LBD基因家族的CRL1基因超表达与基因敲除载体,转化中花11水稻愈伤,获得5个转基因超表达家系,8个转基因敲除家系。通过对遗传材料种子进行愈伤诱导实验,发现CRL1基因的超表达材料与对照组无明显差异,但是CRL1基因敲除材料的愈伤组织诱导受到了强烈抑制,与已知的水稻Os IAA10的RNA干扰材料表型类似。为了研究这两者的关系,研究首先进行了亚细胞定位实验,结果显示Os IAA10同时定位在细胞核与细胞膜上,对酵母双杂交筛库实验得到的大量突变株进行菌落PCR并测序后发现,Os IAA10只能与Os ARF家族众多成员中的Os ARF5,17,21,23四个转录因子发生互作。以CRL1基因启...

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【部分图文】：

图1-1生长素信号通路Fig1-1Theauxinsignalingpathway

水稻愈伤诱导过程中生长素通路的研究7图1-1生长素信号通路Fig1-1Theauxinsignalingpathway生物信息学和分子生物学研究已经重新标记了许多Aux/IAA蛋白，现有资料显示它们通常具有四个保守的特征域：域I，II，III和IV。域I已被鉴定为具有乙烯反应因子....

图3-1CRISPR载体结构图(a)与部分终载体酶切胶图(b)，靶点位置示意图（c）

水稻愈伤诱导过程中生长素通路的研究273.结果3.1基因敲除载体构建使用MluⅠ酶切CRISPR-CRL1终载体质粒，切下串联的gRNA表达盒片段大小约为1300bp，如图3-1所示，敲除靶点位于cDNA的前半部分。(a)(b)(c)图3-1CRISPR载体结构图(a)与部分终载....

图3-2核文库筛选示意图

华中农业大学2020届硕士研究生毕业论文283.2超表达与酵母双杂交载体构建从水稻叶片总DNA中扩增CRL1基因片段，选取载体上的酶切位点是BamHI和KpnI，基于无缝克隆构建载体的方法，我们在目的片段5’和3’分别引入了酶切位点和载体的同源臂，利用重组酶将目的片段连接至线性化....

图3-3部分转基因植株阳性检测结果

水稻愈伤诱导过程中生长素通路的研究293.3.基因转化植株的阳性鉴定通过农杆菌介导法，将终载体转化中花11水稻愈伤组织，获得CRL1基因T1代转基因水稻植株113株，对幼苗进行取样，抽提DNA后用潮霉素标记基因引物进行PCR阳性检测，部分检测结果如图3-3所示。MC1阳阴C13C....

本文编号：3893902