二倍体野生马铃薯S.verrucosum花药培养与再生植株鉴定

发布时间：2024-03-07 01:20

　　马铃薯栽培种(Solanum tuberosum L.)高度杂合,且呈四倍体遗传,使得该作物科研和育种进展缓慢。本研究以自交亲和、杂合的二倍体马铃薯S.verrucosum(PI 275256)为供体材料,研究了花苞大小与小孢子发育时期的对应关系,不同培养基激素配比对再生植株诱导率的影响。通过花药培养获得了23份再生植株,并对上述再生植株进行倍性鉴定和纯合分析。主要结果如下:1、确定了单核靠边期对应的花苞大小。单核靠边期是花药培养最合适诱导的时期,当PI 275256子代的花苞长度约6.0 mm,花药长度约4.0 mm,以浅绿色为主时,为该材料的单核靠边期。2、建立了高效稳定的花药培养体系。以MS培养基为基础,添加不同浓度的NAA、6-BA、KT,共设计了11种诱导培养基。研究发现2 mg/L NAA+1 mg/L 6-BA+0.5 mg/L KT+MS诱导培养基诱导率最高,响应率为11.88%。通过花药培养共获得了23份再生植株。3、明确了再生植株的倍性。经保卫细胞叶绿体计数法和流式细胞术倍性鉴定,23株再生材料有单倍体17株、二倍体6株。4、初步鉴定了再生植株的纯合度。利用位于不同...

【文章页数】：63 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
缩略词表
一、引言
    1.1 马铃薯作为研究材料存在的问题
        1.1.1 栽培马铃薯(S.tuberosumL.)作为研究材料存在的问题
        1.1.2 S.verrucosum材料特性
    1.2 获取马铃薯纯合体方法的研究进展
        1.2.1 连续自交
        1.2.2 孤雌生殖
        1.2.3 花粉培养
        1.2.4 花药培养
    1.3 影响花药培养的因素
        1.3.1 基因型的研究
        1.3.2 小孢子发育时期的研究
        1.3.3 供体植株的生理状态和生长条件的研究
        1.3.4 预处理方法的研究
        1.3.5 表面消毒和花药剥离的研究
        1.3.6 培养基成分的研究
        1.3.7 培养条件的研究
        1.3.8 愈伤组织的分化和植株再生的研究
    1.4 马铃薯花药培养研究进展
        1.4.1 S.tuberosum及其它马铃薯花药培养研究进展
        1.4.2 S.verrucosum花药培养研究进展
    1.5 研究目的及意义
二、材料与方法
    2.1 试验材料
    2.2 试剂与仪器
    2.3 实验方法
        2.3.1 小孢子发育时期的鉴定
        2.3.2 花苞预处理
        2.3.3 愈伤诱导培养基
        2.3.4 愈伤组织的继代、分化培养
        2.3.5 再生植株倍性鉴定
        2.3.6 再生植株纯合分析
        2.3.7 再生植株亲缘关系鉴定
三.结果与分析
    3.1 花药培养获得再生植株
        3.1.1 花苞大小与花粉发育时期的对应关系
        3.1.2 花药培养获得再生苗
        3.1.3 不同激素配比对花药愈伤组织诱导的影响
        3.1.4 ZIG培养基诱导再分化
    3.2 再生植株的倍性鉴定
        3.2.1 气孔保卫细胞叶绿体计数法进行倍性鉴定
        3.2.2 流式细胞分析法进行倍性分析
    3.3 再生植株的纯合分析
        3.3.1 多态性引物筛选
        3.3.2 纯合分析
    3.4 再生植株的亲缘关系鉴定
四.讨论
    4.1 花药培养响应率
    4.2 再生植株纯合鉴定
五 全文总结
参考文献
附录1 培养基及缓冲液的配方
附录2 实验方法及操作
附录3 SSR引物信息
致谢



本文编号：3921170