籽粒苋AhPPDK原核表达及AhPEPC启动子遗传转化研究

发布时间：2024-03-16 00:25

　　籽粒苋是重要的C4经济作物。本文利用相关性分析和通径系数分析研究了影响籽粒苋净光合速率的相关因素;对本课题组克隆的籽粒苋PPDK基因(AhPPDK)(GenBank注册号:JF907701)进行了原核表达,获得了原核重组蛋白,测定了酶活性;利用农杆菌介导转化方法将不同缺失长度的AhPEPC启动子转入烟草和马铃薯中,以验证其功能。研究结果如下:(1)籽粒苋净光合速率Pn和温度Tm、光合有效辐射PAR、蒸腾速率Tr、叶片气孔导度Cleaf、胞间CO2浓度CO2int相关分析表明,Tm、PAR、Tr与Pn呈正相关,且相关关系都达到极显著水平,Cleaf、CO2int与Pn呈负相关,且相关关系也达到极显著水平;各个因素之间的相关分析表明,除E和Cleaf呈显著相关外,其他各因素之间都达到极显著相关水平。对上述相关因素做通径分析,结果表明,PAR、Tr和Cleaf与Pn的通径系数为正值,Tm和CO2int与Pn的通径系数为负值,上述5个因素对净光合速率Pn的相对重要性依次为:PAR(0.339)>Tr(0.299)>Cleaf(0.251)>Tm(-0.522)>CO2i...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图3.1PCR扩增AhPPDK目的基因M：DL5000DNAMarker；1,2：PCR扩增产物

析及原核表达载体构建体pUC-AhPPDK为模板进行PCR扩增，克隆Ah胶电泳，可见大约3kb的片段（如图3.1）。将该片段回收，构建形成重组质粒pEASY-E1-AhPPDK，对重组质粒进baⅠ和SacⅠ分别单酶切检测（如图3.2），

图3.2重组原核表达载体pEASY-E1-AhPPDK的酶切检测M：DL5000DNAMarker；1-3：SacⅠ、XbaⅠ、EcoRⅠ分别单酶切

3.2重组原核表达载体pEASY-E1-AhPPDK的酶切检测000DNAMarker；1-3：SacⅠ、XbaⅠ、EcoRⅠ分别单SY-E1-AhPPDK上，AhPPDK序列上游为6-His测序结果表明，6-His-AhPPDK不会出现移码原核表达载体构建正确....

图3.4SDS-PAGE电泳分析pEASY-E1-AhPPDK的表达情况

图3.4SDS-PAGE电泳分析pEASY-E1-AhPPDK的表达情况M：蛋白marker44.3-200KDa；1、2、3分别为AhPPDK基因经IPTG诱导6h、4：AhPPDK基因未诱导图3.5SDS-PAGE电泳分析pEASY-E1....

图3.5SDS-PAGE电泳分析pEASY-E1-AhPPDK诱导6h的沉淀和上清表达情况

.5SDS-PAGE电泳分析pEASY-E1-AhPPDK诱导6h的沉marker44.3-200KDa；1、2分别为pEASY-E1-AhPPDK诱酶液磷酸双激酶的酶活测定表达的大肠杆菌的菌液超声波破碎，收集上清和沉PPDK酶的活性，如表3.2所示，结....

本文编号：3928837