七种转基因水稻质粒DNA标准物质研制

发布时间：2024-04-02 20:04

　　标准物质被广泛用于转基因作物检测中,转基因标准物质研制对于检测方法建立和检测设备开发至关重要。本研究针对我国研发的转基因水稻转化体,分别构建了四个单靶标质粒DNA标准分子和一个多靶标质粒DNA标准分子。对构建的质粒DNA分子进行了适应性、均匀性和稳定性分析,并利用微滴数字PCR(dd PCR)方法进行了特性量值评估。本文第一部分分别针对转基因水稻PA110-15、G281、G6H1和4114-7-2,构建了四个新型的单靶标质粒分子pPA110-15、pG281、pG6H1和p4114-7-2。这四个分子均含有一段长为279 bp的水稻内标准基因SPS片段和转化体特异性序列,且这两个片段之间插入了一段长为2463 bp的水稻基因组间隔片段。质粒分子的适应性分析结果显示以pPA110-15、pG6H1和pG281作为标准物质在定量PCR体系中构建的内外源标准曲线均具有理想的线性相关系数(0.9994-1.0000)和良好的扩增效率(96%-98%)。各标准曲线重复性的相对标准偏差为0.09%至2.12%,重演性的相对标准偏差为0.10%至1.25%。各靶标的最低检测下限(LOD)均为5 c...

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【部分图文】：

图1-11996年-2015年全球范围内转基因作物种植情况

图1-11996年-2015年全球范围内转基因作物种植情况[3]Figure1-1Globalareaoftransgeniccropsduring1996-2015[3]据统计，2015年全球共有11个国家的转基因作物种植面积超过100万公顷（表1....

图1-2四种转基因成分检测策略的比较

品系特异性PCR的特异性最高，应用最为广泛。根据检测原理的不同，PCR检测方法主要有定性PCR、定量PCR和数字PCR等。图1-2四种转基因成分检测策略的比较Figure1-2FourtypesofPCR-basedGMcompositionde....

图1-3定量PCR的实时扩增图与标准曲线的建立Figure1-3Real-timeamplificationplotandstandardcurveoffluorescentquantitativePCR

等人将荧光探针法用于检测三种转基因大豆RRS、A2704-12和MON89788，并建立了一种新型的实时荧光定量PCR检测方法。图1-3定量PCR的实时扩增图与标准曲线的建立Figure1-3Real-timeamplificationplotandstan....

图1-4微滴数字PCR原理示意图

32]。图1-4微滴数字PCR原理示意图[32]Figure1-4PrincipleofdigitalPCR,（a）经过稀释的目标DNA样品，（b）样品被分散到各个微小的反应单元，（c）PCR扩增反应，（d）检测荧光信号计数数字PCR可以达到在数万个PCR反应....

本文编号：3946134