茶树CsUGGT基因克隆及其功能验证

发布时间：2024-05-18 07:54

　　茶儿茶素是茶树次生物质代谢的重要成分,对人体健康有益,且在茶叶色、香、味品质形成过程中具有重要作用。深入研究茶儿茶素生物合成途径中的结构基因和调控基因,将对提升茶叶加工品质及发掘茶树优异种质资源产生积极的推动作用。迄今为止关于酯型儿茶素的合成途径已经较为清晰,1-O-没食子酰-β-葡糖苷(βG)是没食子转移过程中活化的没食子酸载体,它既是没食子酸供体,也是没食子酸受体。我们在前期研究获得了10余个糖基转移酶,通过基因表达分析,发现其中一个候选基因UGGT的表达量与EGCG含量显著相关,推测UGGT酶负责βG的形成。本研究采用PCR技术扩增获得了UGGT基因的CDS序列,并对该序列进行了生物信息学分析,然后通过原核表达和异源植物表达,在体外及体内验证了该基因的功能。本论文主要结果如下:1、以黄金茶1号幼嫩芽叶为材料,通过设计特异性引物Cs UGGTF\Cs UGGTR克隆了Cs UGGT基因的CDS序列,其阅读开放框为1467 bp,编码488个氨基酸,蛋白分子量估计为54547.67,理论等电点为5.30,该基因推测的氨基酸序列与核桃、欧洲栎、葡萄、蓖麻、草莓、葡萄柚UDP-糖基转移酶...

【文章页数】：62 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1-1酯型儿茶素生物合成路径图

第一章绪论的区别仅在于C环3号位有无没食子酰基化。上世纪八十年代技术，在茶树新梢中探究没食子酸与酯型儿茶素合成的关系，与简单儿茶素（EC和EGC）反应从而酰基化生成酯型儿茶素科研小组于2005年[48]提出1-O-没食子酰-β-葡糖苷（βG）是没食食子载体，它....

图2-2CsUGGT基因克隆的PCR图谱

析基酸序列的预测CBI数据库及DNAst片段包含一个完整的源性分析GGT氨基酸序列与其件将CsUGGT基因的对比（图2-3），该基柚的相似性分别为832CsUGGT基因克隆的NA标准带200；1：CsUectrophoresisgraphofPCR:....

图2-4茶树CsUGGT的亲疏水性预测

蛋白的系统发育树分析ALIGN软件将编码CsUGGT的氨基酸序列与其他物种基酸进行系统进化分析，分析结果见图2-5。从图中转移酶类蛋白可大致分成三类：黄麻、可可、棉花、；麻疯树、蓖麻、草莓、欧洲栎、核桃为一类；山葡树为一类。说明茶树中编码CsUGGT的氨基酸序列与中的....

图3-1转化CsUGGT-T重组质粒菌落PCR检测注：M：DNA标准带200;1-5：为随机挑选的5个单菌落

1转化CsUGGT-T重组质粒菌落DNA标准带200;1-5：为随机挑选heelectrophoresisgraphofPCRresutransferedtherecombinantplasmidAMarker200;1-5:Random....

本文编号：3976671