利用诱导子技术提高烟草毛状根中茄尼醇含量的研究

发布时间：2024-06-11 05:15

　　目的:烟草除用于制造卷烟外,还是心血管疾病防治药物辅酶Q10(CoQ10)的化学合成前体物茄尼醇的最主要原料。烟叶中茄尼醇含量为0.3%-3%左右,但烟叶次生代谢物种类丰富,从中较难提取高纯度的茄尼醇。毛状根生长迅速,可以合成次生代谢物。本研究用四种发根农杆菌(Agrobacterium rhizogenes)感染烟草叶片诱导产生毛状根,探讨适合烟草毛状根诱导的适宜菌株,以诱导子作为调控因子对烟草毛状根的生长和茄尼醇积累进行研究,筛选对烟草毛状根生长和茄尼醇积累诱导效果更好的诱导子。方法:本研究利用四种发根农杆菌诱导烟草无菌叶片,筛选适合烟草毛状根诱导的菌株。在接种量和基本培养基两个方面优化培养条件,以获得生长迅速、茄尼醇含量相对较高的烟草毛状根根系,通过PCR分子检测农杆菌基因rolB验证是否发生农杆菌基因的转移。在培养的0d,9d,18d分别添加5μM,10μM,20μM,50μM的H₂O₂和10μM,50μM,100μM,200μM的水杨酸(SA),研究烟草毛状根茄尼醇诱导的适宜诱导子以及其添加时间和浓度对烟草毛状根生长量茄尼醇含量的影...

【文章页数】：49 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
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第一章 引言
    1.1 研究意义
    1.2 文献综述
        1.2.1 茄尼醇概述
        1.2.2 毛状根及次生代谢物
    1.3 本论文所要解决的问题
第二章 烟草毛状根的诱导和茄尼醇含量分析
    2.1 实验材料和仪器试剂
        2.1.1 植物材料及菌株
        2.1.2 仪器与主要试剂
        2.1.3 主要试剂配制
        2.1.4 培养基配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 烟草无菌苗培养
        2.2.2 农杆菌的活化
        2.2.3 毛状根的诱导与筛选
        2.2.4 毛状根再生苗的获得
        2.2.5 毛状根基因组提取
        2.2.6 毛状根的PCR检测
        2.2.7 茄尼醇和其他主要次生代谢物含量测定
    2.3 结果分析
        2.3.1 烟草无菌苗培养
        2.3.2 毛状根的诱导与筛选
第三章 烟草毛状根培养条件的优化
    3.1 实验材料和仪器试剂
        3.1.1 植物材料
        3.1.2 实验仪器
        3.1.3 培养基配制
    3.2 实验方法
        3.2.1 毛状根生长曲线测定与初始接种量的选择
        3.2.2 毛状根基本培养基筛选
    3.3 数据统计与分析
    3.4 结果与讨论
        3.4.1 毛状根生长曲线测定与初始接种量的选择
        3.4.2 毛状根基本培养基筛选
第四章 诱导子对烟草毛状根中茄尼醇的诱导
    4.1 实验材料与试剂
        4.1.1 植物材料
        4.1.2 仪器与主要试剂
        4.1.3 培养基配制
    4.2 实验方法
        4.2.1 不同诱导子处理对毛状根生长和茄尼醇含量的影响
        4.2.2 H₂O₂处理对茄尼醇代谢途径关键基因表达量的影响
    4.3 结果与分析
        4.3.1 诱导子处理对毛状根生长和茄尼醇含量的影响
        4.3.2 H₂O₂处理对茄尼醇关键酶基因表达量的影响
结论
参考文献
攻读学位期间公开发表的论文
附录
致谢



本文编号：3992462