丹参miR408前体序列的克隆及功能分析

发布时间：2024-12-11 05:51

　　植物microRNAs(miRNAs)是一类长度为20-24 nt的非编码小RNA,通过抑制mRNA的翻译或者降解mRNA来调控靶基因的表达。miR408是由21个核苷酸组成的高度保守的miRNA分子,在多个物种中已有报道。研究表明,miR408在植物体内可参与非生物胁迫应答、维持铜离子平衡,miR408过表达的拟南芥幼苗其花青素含量是对照的7-8倍,说明miR408可能参与植物的次生代谢调控。丹参(Salvia miltiorrhiza Bunge),唇形科多年生药用植物,其根是我国传统大宗药材,对心脑血管疾病、组织损伤、血脂升高等具有很好疗效,被誉为“药用模式植物”。目前关于丹参中miRNA的功能研究尚未见报道。本实验从丹参中克隆得到miR408前体序列,进一步获得该基因的过表达转基因烟草及干涉转基因丹参株系,以期对调控丹参次生代谢产物的生物学功能进行初步研究。本实验的研究内容与结果如下:1.基于丹参基因组Survey数据库,从中搜索并通过PCR克隆得到长度为366 bp的miR408前体序列及长度为723 bp的上游启动子区,并将miR408的前体序列命名为Sm-MIR408。通过...

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【部分图文】：

图２－２?洲前体二级结构预测??

能为－７５．００?ｋｃａｌ／ｍｏｌ，故能开多成稳定的莖环结构，ｍｉＲ４０８／ｍｉＲ４０８＊双链结构区分别??位于茎环结构的两臂，ｍｉＲ４０８成熟序列（５＇－ＡＵＧＣＡＣＵＧＣＣＵＣＵＵＣＣＣＵＧＧＣ－３＇）??位在于茎环结构３’端（图２－２箭头所指位置）。??在小ＲＮＡ数据库ｍｉ....

图2-3miR408成熟序列碱基保守性分析

ｍｉＲ４０８的前体序列及成熟序列，分析丹参ｍｉＲ４０８和数据库中所有植物??４０８成熟序列碱基保守性，结果如图２－３所示，ｍｉＲ４０８家族具有很高的保守性，??９，?１３，１５，１６，?１９位上的碱基保守性最高，且丹参ｍｉＲ４０８的成熟序列??＇－ＡＵＧＣＡＣＵＧＣＣＵＣＵＵＣＣ....

图２－５?見／（财在不同组织中的表达量??不同字母表示有显著差异（Ｐ＜〇．〇５）??Ｆｉｇｕｒｅ?２－５?Ｒｅｌａｔｉｖｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｌｅｖｅｌ?ｏｆ?Ｓｍ－ＭＩＲ４０８?ｉｎ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｐｌａｎｔ?ｔｉｓｓｕｅｓ??

?洲在不同器官的相对表达水平??运用实时定量ＰＣＲ方法检测在丹参的根、茎、叶，花中表达，结??果如图２－５所示，５ＶＷ－Ｍ／／Ｗ仰在不同组织中都有表达且表达量不同，在花中的表达??量最高，其次是叶、茎和根。??７?－Ｉ??—５?－??ｃ??．２?ｂ??？?４?－?Ｔ??＾?１??....

图３－３不同处理条件下加－Ｍ／Ｔ＾仍的表达变化??不同字母表示有显著差异（ｐ＜〇．〇５）??Ａ：?５００?ｕｍｏｌ／Ｌ?ＭｅＪＡ?Ｂ：机械损伤??Ｃ：光?

用５００ｕｍｏｌ／Ｌ茉莉酸甲酯（ｍｅｔｈｙｌｊａｍｓｏｎａｔｅＭｅＪＡ）处理丹参植株，ｌｈ后表达量??开始降低，在８?ｈ达到最低值，表达量仅为对照的１０％，之后升高，在２４?ｈ其表达量??与对照没有显著性差异（图３－３Ａ）；机械损伤处理１?ｈ后加－Ｍ／Ｍ＾表达量最低，为对??照的....

本文编号：4016288