5种相别相关基因在大鲵性腺发育中的表达分析

发布时间：2020-03-30 01:46

【摘要】：性腺发育是发育生物学当今研究的热点领域之一。有关性别决定与性腺发育相关基因的研究,在哺乳类与鱼类已有了较为深入的认识,而对两栖类的相关研究却非常有限。本文以我国特有的有尾两栖动物——大鲵(Andrias davidianus)为研究对象,在大鲵性腺高通量转录组测序数据筛选出的差异表达基因的基础上,选取了 Dmrt1、Fgf9、Fsh-R、Wnt4及Foxl2等5种性别相关基因,采用半定量RT-PCR技术检测了 5个目的基因分别在24月龄大鲵精巢或卵巢中的表达特点,进一步采用了原位杂交技术分别对Dmrt1和Fgf9基因在18月龄、24月龄大鲵精巢和卵巢的表达情况进行了定位。旨在初步探讨该5种性别相关基因在大鲵性腺发育过程中的作用,为构建大鲵性别决定与分化的基因调控网络、探讨大鲵的性腺发育等研究工作积累基础实验数据,也为大鲵的种族延续及大鲵产业的可持续健康发展提供理论依据。主要结果与结论如下:1.首次扩增出了大鲵Dmrt1、FgfP、Fsh-R、Wnt4及Foxl2等5种性别相关基因的部分cDN A序列。2.RT-PCR结果显示,Dmrt1虽然在24月龄大鲵的精巢和卵巢中均有表达,但精巢的表达明显高于卵巢。原位杂交结果显示,18月龄大鲵的Dmrt1mRNA强阳性表达主要在精巢基部分化程度较低的精原细胞和体细胞,阳性表达主要在精巢中部结缔组织的体细胞部位以及生精小叶内的精原细胞;24月龄大鲵的Dmrt1 mRNA的强阳性表达主要在非成熟区的精原细胞以及体细胞,阳性表达主要在精原细胞以及间质细胞,在精子上未见有阳性表达。18月龄大鲵的Dmrt1mRNA的阳性表达主要在卵泡细胞,24月龄大鲵的Dmrt1mRNA弱阳性表达也主要在卵泡细胞、并在卵母细胞核周围有微弱表达,即18、24月龄大鲵精巢Dmrt1 mRNA的阳性表达均强于卵巢。基于以上结果,本文认为Dmrt1基因对大鲵精巢发育及精子发生具有重要调控作用,特别是对精原细胞增殖和精巢功能维持起着重要作用,同时可能也在卵子发生中起到一定的作用。3.RT-PCR结果显示,Fgf9虽然在24月龄大鲵的卵巢和精巢中均有表达,但在卵巢的表达明显强于精巢。原位杂交结果显示,18月龄大鲵的Fgf9 mRNA的阳性表达主要在卵泡细胞,24月龄的强阳性表达也主要在卵泡细胞、在卵母细胞核周围有弱阳性表达;18月龄大鲵的Fgf9mRNA强阳性表达主要在精巢上部结缔组织的体细胞部位、阳性表达出现在生精小叶内的精原细胞,24月龄的阳性表达主要在精原细胞以及间质细胞,在精子上未见有阳性表达,即随着大鲵性腺发育,Fgf9在精巢的表达呈逐渐下降趋势,而在卵巢的表达呈逐渐上升趋势。基于以上结果,本文认为Fgf9基因是与大鲵性腺发育密切相关的基因,不但与大鲵卵巢的发育关系密切,而且可能还与精巢的发育有关。4.石蜡切片结果显示,18月龄大鲵精巢未见有精子出现,而24月龄精巢生精小叶的成熟区聚集了较多成簇排列的精子,24月龄大鲵卵巢内的卵泡明显大于18月龄。RT-PCR结果显示,Fsh-R在精巢表达较强、卵巢表达较弱。由此本文认为,Fsh-R基因对大鲵的精子发生具有刺激作用,并且可能还对大鲵卵泡发育具有一定的促进作用。5.RT-PCR结果显示,Wnt4和Foxl2均在24月龄大鲵卵巢有较强表达,精巢中几乎未见有表达。基于此本文认为,Wnt4和Foxl2基因可能参与调节了大鲵卵巢的发育。
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目的及意义逡逑（ｊｍＭｏｓ１邋ｔ／ａｖＷｔｗｗｓ）俗称娃娃鱼，隶属于两栖纲、有尾目、隐鲍ｒａｎｃｈｉｄａｅ）。大鲍作为我国特有的有尾两栖类，，属于国家ＩＩ级重点界自然保护联盟（ＩＵＣＮ）将其受威胁程度定为极危（ｃｒｉｔｉｃａｌｌｙ邋ｅｎｄａｎｇ大鲵还是全球现存寿命最长、体型最大的两栖动物，也是由水栖向渡的重要类群，有重要的科研、生态与经济价值，是用来研究动样性和性别决定分子机制等课题的良好材料１１１９１，具有“活化石”鲵具有较大的经济价值，再加之人工繁育技术的突破，使得大鲵各地蓬勃发展，但同时制约该产业发展的一些理论与技术瓶颈也岭山区，大鲵一般于每年秋季进入繁殖盛期，受精卵要经过３５－４０孵化出幼鲵［１２１］。因此，在自然条件下，幼鲵前期的生长发育都是的。，出２８－４９邋ｄ生，

分别计算出了研宄用１８月龄与２４月龄共１２尾大鲵全长和体重逡逑的平均值，通过独立样本Ｔ检验对不同月龄雌、雄大鲵的全长和体重进行了比较逡逑分析（图３－１）。从图３－１可以看出，１８月龄的雌、雄大鲵在全长和体重方面有显逡逑著差异（尸＜0．0５），２４月龄的雌、雄大鲵在全长和体重方面有极显著差异（尸＜０．０１），逡逑且相同月龄雄鲵的全长和体重均明显大于雌鲵。逡逑５０逦逡逑N希

本文编号：2606840