草鱼脂代谢相关酶的分离纯化、分子克

发布时间：2024-07-11 02:28

　　草鱼(Ctenopharyngodon idella)是我国水产养殖的主要养殖鱼类之一。2011年产量达到420万吨(FAO,2012)。随着草鱼养殖业的发展,各种病症的频发,特别是与脂代谢相关的疾病(脂肪肝综合症),严重制约其产业的可持续发展。本论文以具有重要经济价值的草鱼为研究对象,以与脂代谢关键酶(葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)和肉碱棕榈酰转移酶I(CPT I))为研究重点,借助蛋白水平(酶学动力学特性)和分子水平(克隆、结构分析和组织表达)的手段,拟对草鱼不同组织和不同发育期的关键酶进行研究,同时从脂代谢相关酶的酶活性及其基因表达水平研讨了矿物元素铜和锌与脂代谢的关系。1草鱼G6PD的分离纯化及其动力学性质的研究本研究从草鱼肝胰脏中通过2’,5’-ADP-琼脂糖4B亲和层析和DEAE琼脂糖离子交换层析分离纯化G6PD,并研究了该酶学的分子量、最适温度、最适p H和碱性条件下的稳定性、动力学参数以及金属离子对酶活性的影响。实验发现,纯化后G6PD最终酶活性为18U/mg蛋白,纯化倍数为1066,最终纯化回收率为19.5%,亚分子量为71.85k Da。G6PD的最适温度为42...

【文章页数】：139 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图1.1G6PD在细胞代谢中的作用Fig.1.1RoleofG6PDincellularmetabolism(Salati和Amir-Ahmady2001)

戊糖磷酸途径（Pentosephosphatepathway,PPP）又称戊糖支路（pentoseshun酸葡萄糖酸途径（phosphogluconatepathway）及戊糖磷酸循环（pentosephosphycle），是动物体内糖代谢过程中的重要途径，其主要生理....

图1.2可逆抑制作用动力学曲线（A：竞争性抑制曲线；B：非竞争性抑制曲线；C：反竞争性抑制曲线）（王镜岩等，2002）

草鱼脂代谢相关酶的分离纯化、分子克隆、酶动力学性质及对铜和锌的响应研究015）应用毛细管微反应酶的酶活测定方法研究G6PD，结果表明Cu2+，Pb2+，+竞争性抑制G6PD，而KMnO4为反竞争性抑制。同时，deSchroeder（2005）分Zn2+对来源于蟾蜍卵巢....

图1.3鱼体肝脏组织中能量代谢主要途径

示了高脂饲料能抑制脂肪的生成，同时，表明高脂对肝存在组织特异性。Regost等（2001）研究表明投喂高脂生成酶活性没有显著性差异，可能与鱼的种类有关。在胞实验下，发现EPA和DHA均抑制了脂肪的沉积（Alvar03），对黑鲷的研究中也得到了类似的结果（Om等，20。饲....

图2.1(A)：G6PD的SDS-PAGE电泳图（泳道1：组织匀浆液；2：SDS-PAGE标准蛋白；3和4为纯化的G6PD）；(B)、(C)、(D)分别为pH、温度和pH稳定性对草鱼肝胰脏G6PD活性的影响

本文编号：4005111