美洲鳗鲡与其养殖水体细菌的耐药性、抗性基因及整合子的研究

发布时间：2020-05-03 13:32

【摘要】：在养殖中不可避免地直接或间接使用过抗菌药物,如此养殖出来的水产品往往携带耐药细菌,不仅削弱抗菌药物对动物细菌性疾病的控制效果,且还存在向人类致病菌传播耐药性的潜在风险。本文研究美洲鳗鲡及其养殖水体分离耐药细菌,并分析耐药细菌的种属组成、耐药性、特定耐药基因及耐药整合子,进而利用传代实验研究细菌耐药性的消除。经抗性平板筛选出108株耐药菌,由16S rDNA鉴定属于4纲20个属,γ-变形菌纲的气单胞菌属(24.1%)、柠檬酸杆菌属(17.6%)和不动杆菌属(16.7%)的出现频率最高。对17种抗菌药物的药敏试验结果显示,108株耐药菌株对阿莫西林的耐药率高达90.7%,对四环素、抗叶酸类、酰胺醇类、利福平类的耐药率也在60%~80%之间。93.5%(101/108)的菌株对3种及以上的药物具有抗性,其中有两株对13种抗菌药具有抗性,两株对14种抗菌药具有抗性。美洲鳗鲡的肠道、表皮、鳃部及水样分离菌株的多重耐药指数中水样的最高。分离菌株数较多菌属中柠檬酸杆菌属和克雷伯菌属的耐药水平最高,而不动杆菌属则相对较低。对29种抗性基因的PCR检测结果显示,耐药菌株中耐β-内酰胺类药物的基因blaTEM检出率高达100%,耐药基因tetC和sulI的检出率也高达96.3%。其次,aadA和floR的检出率分别为74.1%和69.4%,qnrB、arr2/3的检出率在50%左右。此外,在本研究中,所有菌株至少检测到两种抗性基因,其中肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)C11检测到18种抗性基因。108株耐药菌株中86株含有Ⅰ型整合子,10株携带Ⅱ型整合子,没有检测到Ⅲ型整合子。10株携带Ⅱ型整合子的菌株均同时携带Ⅰ型整合子。Ⅰ型整合酶阳性菌株有74株成功扩增可变区,其中33株携带空整合子,另外41株菌的整合子共含有14种不同基因盒排列。包括一种新的基因盒排列:dfrB4-catB3-blaOXA-10-aadA1,基因盒排列dfrA12-orfF-aadA2分布最为广泛。基因盒排列中优势基因盒为dfr和aad基因家族。10株int Ⅲ阳性菌株全部都扩增出可变区,均含有相同的基因盒排列dfrA1-catB2-sat2-aadA1。耐药菌株T4以空白MH肉汤进行传代培养,随着代数的累加,对TET耐药的菌群比例迅速下降。紫外照射不影响T4菌株耐药性。而低浓度TET和37℃高温实验组传代子的耐药率基本保持在100%,这意味着低浓度抗生素和高温等逆境可以保持细菌耐药性的稳定。此外SDS的存在也不利于T4耐药性的消除。T4原代所携带的基因中,经PCR扩增检测到strA/B、aphA1和blaTEM基因在耐药性消除菌株中仍然稳定存在未被消除,而tetD、floR、dfrA12和Ⅰ型整合子均消除未见。本研究分析了美洲鳗鲡养殖生态群落中耐药菌的多样性、种属分布以及多重耐药情况;补充了美洲鳗鲡动物源细菌在抗性基因和整合子研究方面的匮乏和不足;同时研究了耐药性消除的影响因素,以探索消除细菌耐药性的可能途径。
【图文】：

图 1-1 典型 I 型整合子的结构Figure 1-1 Typical structure of class I integronII 型整合子常见于 Tn7 及其相关转座子上。II 型整合子基因被一个终止子阻断而为缺陷型基因，较少表达。II 型整合酶基因 intIII 编码 318 个氨基酸，，与 I 型整合酶有 46%的同源性。II型整合子3

本文编号：2647604