鱼源益生乳酸菌的筛选及初步应用

发布时间：2020-05-09 19:35

【摘要】：水产养殖业的发展使得水生动物细菌性疾病产生,抗生素的滥用导致多重耐药性、水体环境受到污染以及药物残留等问题。为了改变现状,开发可以代替抗生素并对环境以及动物体自身没有危害的产品,此时益生菌的出现缓解了情况。本实验基于以上想法,从食用鱼肠道分离筛选性状优良的益生性乳菌,为其在水产养殖业中的应用做基础工作。本研究对乳酸菌进行初筛,共获得8株乳酸菌,通过胆盐耐受试验、pH值耐受试验、胰蛋白酶耐受试验、高温耐受试验等,进行复筛,共获得2株性状优良的菌株:W1和B4在胆盐浓度为0.3%培养4h后存活率可以达到60%以上;在酸性和碱性条件下均有很高的存活率;胰蛋白酶对存活率没有影响;可以耐受60℃的温度,对70℃具有一定的耐受性。在药敏试验中可以看出,2株菌株均表现出一定的敏感性。进行动物安全性试验初步确定2株菌株具有安全性。通过16s基因测序以及生理生化试验鉴定W1为棒状乳杆菌,B4为粪肠球菌。为验证分离得到的乳酸菌在体内益生作用,本试验通过乳酸菌口服免疫鲫鱼,共免疫四次,5天为一个免疫周期。采集0d、7d、14d、21d以及28d的各组织和血清样本,部分抗凝血做白细胞吞噬试验,其余血清和组织进行免疫指标的检测,攻毒试验是对乳酸菌的保护效果的评估。通过ELISA方法检测血清中抗体水平,如SOD、ALP、IgM等,结果表明,在免疫后的鲫鱼血清样本中检测到了较高水平的IgM抗体含量,其余抗体水平均呈上升趋势,说明体液免疫增强。免疫相关基因的表达结果显示,W1和B4乳酸菌对鲫鱼主要免疫器官肾脏和肝脏中IL-10、IL-1β、TNF-α、IFN-γ基因表达量具有加强的作用。免疫过程中白细胞吞噬百分比逐渐增强,在三免后达到最大值,四免后稍有下降。腹腔注射嗜水气单胞菌TPS后,W1和B4可以减缓病原菌的感染,增强保护率。为乳酸菌在水产养殖业中的应用做好基础工作。
【图文】：

菌体形态,杆状,乳酸菌,乳白色

通过革兰氏染色在下观察菌株的形态，，在显微镜下观察部分菌株菌体形态如图 1-1，1-2 所示。J1J2J11C2C3L3B4++++㧟㧟㧟㧟22mm、边缘整齐光滑杆状、单独存在、无芽孢同 J1同 J1球形、成对存在、无芽孢同 C2同 C2同 C2乳白色、不透明、圆形、边齐光滑、单菌落很小同 J1同 J1乳白色、不透明、圆形、直约 15mm、边缘整齐光滑乳白色、半透明、圆形、边齐光滑、直径大约 12mm同 C2同 C2

菌体形态,乳酸菌,球状,乳白色

通过革兰氏染色在下观察菌株的形态，在显微镜下观察部分菌株菌体形态如图 1-1，1-2 所示。J1J2J11C2C3L3B4++++㧟㧟㧟㧟22mm、边缘整齐光滑杆状、单独存在、无芽孢同 J1同 J1球形、成对存在、无芽孢同 C2同 C2同 C2乳白色、不透明、圆形、边齐光滑、单菌落很小同 J1同 J1乳白色、不透明、圆形、直约 15mm、边缘整齐光滑乳白色、半透明、圆形、边齐光滑、直径大约 12mm同 C2同 C2
【学位授予单位】：吉林农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S963.211

【参考文献】