泥鳅肠道益生菌的筛选及应用研究

发布时间：2020-05-16 15:24

【摘要】：本文对泥鳅幼鱼和成鱼肠道菌群多样性进行分析,并从中筛选出在体外能产多种酶以及对常见致病菌有较强拮抗作用的潜在益生菌枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),并且评估投喂对泥鳅幼鱼生长、消化酶和非特异性免疫的影响,以期为益生菌在泥鳅配合饲料中的应用提供参考。主要结果如下:(1)运用高通量测序方法研究健康泥鳅成鱼和幼鱼肠道菌群组成。试验分为3组,驯化幼鱼组(C1)、野生幼鱼组(N1)和野生成鱼组(N2)。提取肠道基因组DNA,PCR扩增16SrRNA基因V3-V4片段,采用Illumina公司的Miseq测序平台进行测序。在门水平上,在泥鳅驯养幼鱼(C1)和野生幼鱼(N1)中变形菌门占绝对优势,分别为整个菌群的91.3%、94.4%,厚壁菌门为次优势菌群,分别占8.5%、4.0%;在野生泥鳅成鱼(N2)中,变形菌门占绝对优势占79.6%,梭杆菌门为次优势菌群占18.4%。在属水平上,驯养组幼鱼(C1)肠道菌群有14个属,其中气单胞菌属和不动杆菌属占整个肠道菌群的84.4%;野生幼鱼(N1)肠道菌群有17个属依次其中不动杆菌属和气单胞菌属占整个肠道菌群的90.2%。野生成鱼(N2)肠道菌群有24个属,其中气单胞菌属、不动杆菌属和鲸杆菌属占整个肠道菌群的89.3%。(2)将从野生泥鳅幼鱼和成鱼肠道分离的93株细菌进行体外产酶试验和对常见水生动物病原菌(嗜水气单胞菌、杀鲑气单胞菌、副溶血弧菌和腐败希瓦氏菌)的拮抗试验,得到6株能产3种酶(淀粉酶、脂肪酶和蛋白酶)的菌株和2株有拮抗活性的菌株,再通过溶血性试验筛选出3株无溶血活性的菌株分别为N1-08、N2-08和N2-26菌株。选择同时具有拮抗活性和产酶活性的N1-08菌株,进行安全性试验,将菌悬液(109 cells/mL)通过腹腔注射泥鳅幼鱼,每尾200μL。结果表明,该菌株对泥鳅幼鱼均无致病性。16S rRNA序列分析表明,N1-08菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis,AB735994)相似。(3)以基础饵料为对照组(C),在养殖实验室中进行为期4周的饲喂试验,研究饵料中添加不同浓度(107 cells/g、109 cells/g)的N1-08菌株对泥鳅幼鱼生长、消化酶、非特异性免疫的影响。结果显示,饲料中添加N1-08菌株对泥鳅幼鱼生长性能的提高不显著(P0.05)。饲料中添加不同剂量的N1-08菌株后,能不同程度的提高泥鳅幼鱼肝胰脏和肠道消化酶活力(胰蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶)和非特异性免疫活力(血清溶菌酶活力和血清超氧化物歧化酶活力)。
【图文】：

样品,菌群,物种丰度,肠道微生物

12图 2-2 不同样品 OTU 分布 Venn 图Fig.2-2 Venn diagram of shared OTU analysis for the different s肠道微生物 Alpha 多样性分析道的菌群丰度和多样性见表 2-1，3 组样品覆盖率均接近概率很低。Ace 和 Chao 指数可以对菌群物种丰度进行评最高，，其次 N1 和 C1。样品 C1 的香浓指数和辛普森指数

曲线,曲线,样本,样品

图 2-1 不同样品稀释曲线Fig.2-1 Rarefaction curves of the different samples于 OTU 分布 Venn 图(见图 2-2）可知，三组样品中其中 C1、N1 两个样本间共同存在 20 个 OTUs；C；N1、N2 两个样本间共存在 24 个 OTUs；三个样本共
【学位授予单位】：大连海洋大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S917.4

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