草鱼白介素22及其受体和结合蛋白的分离鉴定

发布时间：2020-05-19 12:20

【摘要】：白介素22(IL-22)是IL-10家族中的一员,作为一种多功能性细胞因子,在炎症性疾病中发挥着重要作用。在机体组织中适量的IL-22有抗菌抑炎、修复黏膜损伤、促进细胞再生等保护机体的功能,但是过量的IL-22会导致机体发生功能性紊乱,从而引发自身免疫疾病。另外,IL-22受体(IL-22RA1)能够介导IL-22信号的转导,IL-22结合蛋白(IL-22BP)能够调控IL-22信号。目前已有大量研究明确了哺乳动物中IL-22、IL-22RA1、IL-22BP的重要性,但是它们在硬骨鱼中的关系和功能地位还有待阐明。本文以草鱼为研究模型,首先分离克隆得到IL-22,其全长CDS序列包含510个核苷酸,共编码169个氨基酸,和其它几种物种IL-22氨基酸序列比对有14.77%到39.91%的相似度。课题采用原核表达系统、变复性处理包涵体蛋白、真核表达系统等方法获取草鱼IL-22重组蛋白并验证了其生物学活性。另外,在验证了IL-22定制抗体的特异性后,利用该抗体在蛋白水平证明了PMA刺激草鱼头肾白细胞促进IL-22分泌。随后,通过染色体基因定位方法分离鉴定了草鱼IL-22RA1,其CDS序列包含1533个核苷酸,编码510个氨基酸,首次获悉了硬骨鱼IL-22RA1编码序列信息。最后分离克隆了草鱼IL-22BP,其CDS序列全长702 bp,共编码233个氨基酸,和其它几种物种IL-22BP氨基酸序列比对有31.20%到82.83%的相似度。通过IL-22BP的组织分布分析发现:IL-22BP在小肠、肝脏中分布较多,在头肾、中肾、脾脏、鳃中分布较少。另外体内细菌感染草鱼实验显示,嗜水气单胞杆菌感染草鱼三天后,草鱼各组织中IL-22BP表达水平明显下降,其中在小肠和肝脏中变化最为明显,提示IL-22BP可能参与了机体的炎症调节。以上研究获悉了草鱼IL-22、IL-22RA1、IL-22BP的分子和表达信息,为探究它们在硬骨鱼免疫调控中的地位奠定了基础。
【学位授予单位】：电子科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S917.4

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本文编号：2670881