嗜水气单胞菌群体感应系统对其生物学特性的调控研究

发布时间：2020-05-20 20:30

【摘要】：嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)是自然界中广泛存在的一种革兰氏阴性菌,是一种典型的人-兽-鱼共患病病原菌,该菌中存在着以AHL为信号分子的群体感应系统(Quorum sensing,QS)1和以AI-2为信号分子的群体感性系统2(QS2)两种群体感应系统,其中,ahy I是信号分子AHL合成酶的编码基因,luxS是信号分子AI-2合成酶的编码基因,本文研究了嗜水气单胞菌群体感应系统对该菌生物学特性的调控作用。利用同源重组原理,构建中间为卡那霉素抗性基因,两侧为luxS基因上下游序列片段的基因敲除质粒,将其转入大肠埃希菌SM10(λpir)感受态细胞,利用接合将质粒转入嗜水气单胞菌ATCC7966,通过抗性筛选、PCR和DNA测序确认嗜水气单胞菌luxS基因缺失突变株。比较野生株和luxS基因缺失突变株生长速度、AI-2合成、胞外蛋白酶合成及生物膜形成的差异。结果显示,与野生株相比,lux S缺失突变株生长周期延长,基本丧失合成AI-2和胞外蛋白酶的能力;突变株生物膜形成能力降低,生长24 h时生物膜形成能力为野生株的14.5%,36 h时生物膜形成能力为野生株的60.0%,突变株生物膜形成速度明显比野生株缓慢,结构更为疏松。利用同源重组原理,构建中间为氯霉素抗性基因,两侧为ahyI基因上下游序列片段的基因敲除质粒,将构建好的质粒转入大肠埃希菌SM10(λpir)感受态细胞,利用接合将质粒转入嗜水气单胞菌ATCC7966,通过抗性筛选、PCR和DNA测序确认嗜水气单胞菌ahyI基因缺失突变株。比较野生株和ahyI基因缺失突变株生长速度、胞外蛋白酶合成及生物膜形成的差异。结果显示,与野生株相比,ahyI基因缺失突变株生长周期延长,ahy I基因突变株胞外蛋白酶的分泌高于野生株,ahyI基因缺失突变株生物膜的形成能力降低,生长12 h时生物膜形成能力为野生株的12.7%,24 h时生物膜形成能力为野生株的31.6%。QS1和QS2对嗜水气单胞菌生长、胞外蛋白酶和生物膜等多种生物学特性有重要的调控作用,本研究为进一步研究群体感应系统在嗜水气单胞菌致病性中发挥的作用奠定了基础。
【学位授予单位】：大连工业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S941.4

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本文编号：2673159