水生动物疫病病原LAMP检测方法的建立

发布时间：2020-05-28 00:26

【摘要】：目的：本研究旨在针对真鲷虹彩病毒(Red sea bream iridovirus、锦鲤疱疹病毒(Koi herpes virus, KHV)、流行性造血器官坏死病毒(Epizootie hematopoietie necrosis virus, EHNV)、鲤春病毒血症病毒(Spring viremia of carp virus, SVCV)、传染性造血器官坏死病毒(Infectious haematopoietic necrosis virus、病毒性出血性败血症病毒(Viral hemorrhagic septicemia virus, VHSV)这六种病毒的宿主不同建立多重LAMP (Loop mediated isothermal amplification)检测方法,该方法是对同一宿主体内的不同病原同步进行检测,这大大节省了检测时间和成本。方法：针对这六种病毒建立了单重LAMP检测方法,对其反应条件进行了优化,并检测了敏感性和特异性。在上述实验的基础上根据宿主不同分别组装多重LAMP反应体系,并检测了其特异性和敏感性。酶切鉴定更进一步验证该方法的特异性。结果：这六种病毒的单重LAMP检测方法的最低检测限分别为：100拷贝/μL,10拷贝/μL,ITCID50,10拷贝/μL,ITCID50, ITCID500且与其它几种重要的水生动物疫病病原无交叉反应,说明建立的LAMP检测方法特异性好。研究二建立的KHV和SVCV的多重LAMP最低检测限达到100拷贝/μL。与其它几种重要的水生动物疫病病原无交叉反应,显示该方法特异性好。与单重LAMP相比,敏感性有所降低。研究三建立的EHNV. IHNV和VHSV的多重LAMP最低检测限是ITCID500与几种重要水生动物疫病病原不发生交叉反应,有良好特异性。对LAMP扩增产物分别采用特定限制性内切酶进行消化,结果表明,与预期酶切片段相符合,可以实现特异性检测的目的。结论：以单重LAMP检测方法为基础,优化反应体系,组建了多重LAMP检测方法,实现了从同一宿主中同时检测多种病毒的目的。
【图文】：

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本文编号：2684396