C型凝集素和TOLL受体在罗氏沼虾先天免疫中的功能研究

发布时间：2020-06-01 01:44

【摘要】：免疫系统包括先天免疫和适应性免疫。无脊椎动物缺乏适应性免疫系统,并依靠先天免疫来保护他们免受病原体和微生物的侵染。本文以罗氏沼虾为研究对象,对其模式识别和免疫相关信号途径进行了研究。(1) C型凝集素(CTL)是在脊椎动物和无脊椎动物的先天免疫中起重要作用的模式识别蛋白。本课题从罗氏沼虾中克隆到一条C型凝集素,命名为MrLec。MrLec的cDNA全长为1431 bp,其开放阅读框为1041bp,编码一个含346个氨基酸残基的蛋白。MrLec的信号肽长为18个氨基酸,另外含有一个长为122个氨基酸的单个碳水化合物识别结构域。系统发育分析表明MrLec与脊椎动物为一个分支,并且与日本囊对虾中的CTL3具有57%的相似性。组织表达分析表明,MrLec在肠中具有较高的表达水平,在血细胞,心脏,肝胰腺,鳃和胃中表达水平较低。在受到副溶血弧菌刺激后,MrLec在鳃和肠中的表达量上升。在受到白斑综合征病毒(WSSV)攻击的24,36和48小时,MrLec在腮中的表达量均上调。同时,MrLec在肠道中的表达量在36和48小时后也上调。MrLec重组蛋白可以在钙离子存在的情况下凝集细菌并且结合革兰氏阳性菌和阴性菌。另外MrLec重组蛋白可以结合脂多糖和肽聚糖,并且可以在虾体内促进机体对弧菌的清除作用。这些结果表明MrLec参与罗氏沼虾的免疫反应。(2) Toll受体作为模式识别受体在无脊椎动物的先天免疫反应中起着至关重要的作用。在这项研究中,我们从罗氏沼虾中发现了一种Toll受体并将它命名为MrToll。其cDNA全长为4257bp,编码1367个氨基酸。它含有17个LRR结构域,1个跨膜结构域和1个TIR结构域。构建的系统进化树分析表明MrToll与果蝇中的Toll7和其他节肢动物的Toll为一个分支。在mRNA水平上,MrToll主要分布于罗氏沼虾的心脏,肝胰腺,腮,胃和肠。在血细胞和淋巴细胞中,MrToll的表达量较低。在受到白斑病毒刺激后的24至48小时,MrToll在腮中的表达量逐渐上调。在罗氏沼虾的腮组织中,甲壳素(Cru)基因Cru3和Cru7的表达水平相对低于Cru2和Cru4。在受到WSSV攻击期间,对罗氏沼虾的鳃组织中的MrToll进行RNA干扰后,Cru3和Cru7的表达受到抑制。同时,抗脂多糖因子(ALF)基因ALF2,ALF3 ALF4和ALF5在鳃组织中的表达量也受到调节。这些研究结果表明MrToll可能有助于罗氏沼虾抗病毒免疫防御反应。
【学位授予单位】：南京师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：S945.41

【参考文献】