哈维氏弧菌TssJ疫苗构建及其对斜带石斑鱼的免疫保护作用效应分析

发布时间：2020-06-06 10:12

【摘要】：哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)是海水鱼类和无脊椎动物的最常见的病原菌之一,常引起鱼类疾病的发生,对海水养殖业造成了巨大的经济损失。最新研究表明,Ⅵ型分泌系统(T6SS)在哈维氏弧菌的群体感应系统、生物膜形成、鞭毛合成和细胞毒力等致病相关功能中可能发挥了重要作用。TssJ是T6SS核心亚基之一,通过N末端酰基化的半胱氨酸残基锚定在外膜上的外膜脂蛋白。本论文利用哈维氏弧菌tssJ基因构建了候选哈维氏弧菌的亚单位疫苗,DNA疫苗和以益生菌传递重组DNA疫苗,分析这三种疫苗对实验动物斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)的免疫保护作用。本研究以哈维氏弧菌GDH11385基因组DNA为模板,扩增获得了tssJ基因,构建候选亚单位疫苗rTssJ,DNA疫苗pCTssJ,益生菌传递的重组DNA疫苗pCTssJ/F3。结果表明,以斜带石斑鱼为动物模型,免疫4周后,致病菌哈维氏弧菌进行攻毒实验,亚单位疫苗rTssJ,DNA疫苗pCTssJ,益生菌传递的重组DNA疫苗pCTssJ/F3,其相对免疫保护率分别为45%,60%,49.86%。血清免疫指标,酸性磷酸酶(ACP)活力结果表明,在免疫1周后,免疫rTssJ组和免疫pCTssJ组均与其PBS对照组有显著提高(p0.05),而免疫pCTssJ/F3组则在免疫3周后与PBS对照组有显著提高(p0.05);碱性磷酸酶(AKP)活力结果表明,在免疫1周后,免疫pCTssJ组与PBS对照组有显著提高(p0.05),而免疫rTssJ组和免疫pCTssJ/F3在免疫2周与对照组PBS有显著提高,其中rTssJ组在免疫2和3周后均与免疫1周后有显著提高,且其活力在3周达最大值;超氧化物歧化酶(SOD)活力结果表明,在免疫1周后,免疫rTssJ组和pCTssJ组与对照组PBS有显著提高(p0.05),而免疫pCTssJ/F3组则在免疫3周后与PBS对照组有显著提高(p0.05)。综上所述,tssJ基因无论是作为亚单位疫苗、DNA疫苗还是益生菌传递DNA疫苗,都具有一定的免疫保护效率,本研究为下一步深入研制具有高保护率的哈维氏弧菌候选疫苗奠定基础。
【图文】：

方、不好动便于鲜活运输等优点，是我国沿海地区的重要海水养殖种类之一。联合逡逑国粮含及农业组织（Ｔｈｅ邋Ｆｏｏｄ邋ａｎｄ邋Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ邋Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ邋ｏｆ邋化ｅ邋Ｕｎｉｔｅｄ邋Ｎａｔｉｏｎｓ，逡逑ＦＡＯ）的数据结果显示（图１．），在２０１０－２０１４年，亚洲在海水环境中的水产品中石逡逑斑鱼的总量从５方４０．５吨增长至１００３％．４２巧，其中中国石斑鱼的产量从４９％０吨逡逑增长到８８１３０吨。逡逑Ｇｌｏｂａｌ邋Ａｑｕａｃｕｌｔｕｒｅ邋Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ邋ｆｏｒ邋ｓｐｅｃｉｅｓ邋（ｔｏｎｎｅｓ）逡逑Ｓｏｕｒｃｅ：邋ＦＡＯ邋ＦｉｓｈＳｔａｔ逡逑７５０逡逑５００逦Ｉ逡逑２５０逦｜Ｈ逡逑０逦＿邋ｌｌｌＪｌｌｉｌ逡逑＾１９５０逦１９６０逦１９７０逦１９Ｓ０逦１９９０逦２０００逦２０１０逡逑■邋Ｅｐｉｎｅｐｈｅｉｕｓｃｏｉｏｉｄｅｓ逡逑图１．逦１９５０－２０１４年的全球斜带石斑鱼总产量（参考ＦＡＯ）逡逑Ｆｉｇ．邋１．邋Ｔｈｅ邋ｗｏｒＩｃＨｏｔａｌ邋ｙｉｅｌｄ邋ｏｆ邋￡７＂邱Ａｅ／ｗ逦ｄｕｒｉｎｇ邋１９５０－２０１４邋ｙｅａｒｓ．（ＦＡＯ）逡逑随着石斑鱼的生殖生长调控及人工育种技术的成熟，使得苗种繁育和成鱼的养逡逑殖进入大规模的发展，养殖密度不断的增加，从而引起水体的氨氮和亚硝酸的含量逡逑增加，，导致其水体环境不断恶化，使得各类有害生物在水体里大量的繁殖。因此，逡逑各种石斑鱼疾病也随之而来，如细菌性疾病（弧菌病，粘细菌病等），病毒性疾病（淋逡逑己囊肿病等），寄生虫疾病（小瓜虫病等）。弧菌（Ｗ如／０）是水产养殖中最常见、流行逡逑广、危害严重的致病性病原菌之一

ｐＥＴ－３２ａ表达系统本身诱导蛋白约为２１ｋＤａ而ＴｓｓＪ蛋白分子量大约为１６逡逑ｋＤａ，因此本实验ＴｓｓＪ融合蛋白大小约为３７邋ｋＤａｎＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳结果显示ＴｓｓＪ蛋逡逑白提取约３７邋ｋＤａ处出现目的条带（图３．），而ｐＥＴ－３２ａ的电泳结果显示为２１邋ｋＤａ逡逑处出现目的条带（图４．）．逡逑Ｍ１２３４５６逦４邋３邋２邋１邋Ｍ邋ｋＤａ逡逑ＫＪＬ／ｃＩ邋．逦逦逦逦＇一，．．＇＇一邋邋邋邋邋邋邋．．．．．．＾逦一中：．．■逡逑４５．０宁巡y泵箠Γ海壕湾义蟉"ｇ邋＇邋ＷＨｆＭＨＭ逦私＊＇＾邋冷逦Ｗ＊邋

本文编号：2699527