子一代中华鲟精子活力及超低温冷冻保存效果的研究

发布时间：2020-06-17 01:17

【摘要】：中华鲟(Acipenser sinensis Gray),主要生活在我国东海和黄海大陆架,是唯一秋季产卵(长江中华鲟)的物种,具有典型溯河洄游产卵的习性：由于过度捕捞、水体污染以及水利工程建设等诸多因素,导致生态环境遭到严重破坏,野生种群不断下降,分布区域逐渐缩小。1996年被国际自然保护联盟(IUCN)列入红皮书,划分到濒危等级。达氏鲟(Acipenser dabryanus),主要分布在长江上游干流及金沙江下游,是鲟鱼类相对小型的淡水定居性鱼类,没有长距离的产卵洄游行为。为长江上游一级急切保护鱼类,是长江珍稀濒危鱼类的典型代表。本论文对从出生至繁殖均生活在人工养殖环境中的中华鲟和达氏鲟子一代精子生物学进行研究,探讨精子活力与阳离子及葡萄糖之间的关系,并与野生亲本中华鲟精子活力进行比较,以期对现行淡水人工规模化繁育技术有积极指导作用。本论文也对子一代中华鲟精子在超低温冷冻保存下的效果进行了研究,重点开展超低温对精子中能量代谢酶和抗氧化酶活性影响的研究,通过不同时间段的冷冻比较精子所受的影响,初步探讨造成冷冻损伤的原因,为子一代中华鲟精子冷冻保存研究和应用奠定理论和实验基础。其主要内容概要如下：1、配制不同浓度Na+、K+、Ca2+、Mg2+和葡萄糖溶液,对子一代中华鲟与子一代达氏鲟新鲜精子活力进行检测。结果如下：子一代中华鲟精子在Na+浓度为4%‰时,精子寿命和快速运动时间均达到最高,分别为263.33 s和45.33 s。K+浓度为0.01%o时,精子寿命最长,为132.33 s,而最佳快速运动时间(46.00s)则出现在K+浓度为0.008‰时。精子寿命和快速运动时间在Ca2+中变化规律相似,均在Ca2+4%‰浓度时达到最高值,分别为53.67s和130.67 s。Mg2+浓度为3‰时,精子寿命达到最高值117.33 s,而快速运动时间最高值(27.20 s)出现在Mg2+浓度为2‰时。葡萄糖浓度为4%‰时,精子寿命达到最高值282.80 s,当浓度为3‰时,快速运动时间达到最高值55.88 s。子一代达氏鲟精子在Na+浓度为2.5‰时,精子寿命最长,为219.67s,在浓度为2%‰时精子的快速运动时间最长,为66.67s；精子对K+浓度在0.004%‰时精子寿命和快速运动时间最长,分别为124.67s、52.67s。而后随浓度的增加活力明显受到抑制；与Na+、K+相反,随着Mg2+、Ca2+浓度的增加,分别超过3‰、1‰浓度后精子产生聚集现象；随着葡萄糖浓度的增加,精子寿命和快速运动时间逐渐延长。表明,Na+、K+溶液可以延长子一代中华鲟和子一代达氏鲟精子的快速运动时间和寿命时间,在 Mg2+、Ca2+较低浓度下都表现出对精子产生较强的抑制作用,外源性葡萄糖可被子一代精子利用,适量的浓度提高精子活力,延长精子精子寿命。与野生亲本中华鲟精子相比,子一代中华鲟精子寿命和快速运动时间均有所下降。2、对子一代中华鲟精子超低温冷冻保存30d、45d和60d。解冻离心后检测子一代中华鲟精子和精浆中能量代谢酶,包括总ATP酶、琥珀酸脱氢酶(SDH)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)和酸性磷酸酶(ACP)；抗氧化酶,包括超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽氧化物酶(GSH-PX)和谷胱甘肽还原酶(GR)。结果表明,超低温冷冻前后精子和精浆中酶的活性呈显著性差异(P0.05)。超低温冷冻后精子中除GR外总ATP酶、SDH、LDH、 CK、ACP、SOD、CAT、GSH-PX活性显著下降,精浆中的酶显著上升。另外,精子和精浆中能量代谢酶和抗氧化酶系统在低温冷冻保存中随保存时间的变化而发生变化。低温冷冻保存30d时,精子中除GR外其他酶的活性均高于45d和60d,呈显著性差异(P0.05)；精浆中酶的活性则与之相反。冷冻30d、45d和60d之间呈显著性差异(P0.05),表明随着冷冻时间的延长,精子所受到的损伤效应更为严重。随低温冷冻时间的延长,精子中GR的活性呈现上升的趋势,精浆与之相反。超低温冷冻对子一代中华鲟精子和精浆中酶活性的影响大,冷冻时间的控制对低温冷冻来说也是重要因素。
【学位授予单位】：长江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S917.4
【图文】：

外形特征,中华

图１．１中华爵外形特征逡逑：■，逦邋Ｆｉｇ．邋１．１邋Ｓｈａｐｅ邋ｏｆ邋Ｃｈｉｎｅｓｅ邋ｓｔｕｒｇｅｏｎ邋（Ａｃｉｐｅｎｓｅｒ邋ｓｉｎｅｎｓｉｓ）逡逑中华爵，隶属于爵科鳄属，是我国特有的江海涧游性鱼类，主要分布我国逡逑的东海、黄海、珠江及长江干流。１９８８年被列为国家一级保护动物，目前被逡逑国际自然保护联盟（ＩＵＣＮ邋）列为极危等级（Ｃ地ｃａｌｌｙ邋Ｅｎｄａｎｇｅｒｄｅ，Ｃ民）逡逑

外形特征,中华

【参考文献】