炎症条件下草鱼HSP70的表达及HSF1对其调控的初步研究

发布时间：2020-07-11 05:25

【摘要】：热休克蛋白70(Heat shock protein 70,HSP70)是一种多功能的细胞因子。细胞受到应激原的刺激时会在短时间内产生大量的HSP70蛋白,HSP70不仅具有分子伴侣的功能,维持细胞的生存和功能,还参与细胞免疫的调节,在机体免疫中起着重要的作用。热休克转录因子(Heat shock transcription factor,HSF)是控制HSP表达的关键调节因子。HSF家族共有四个成员,HSF1、HSF2、HSF3和HSF4。其中,HSF1是HSF家族中最重要的成员,主要负责热休克蛋白的表达调控,其功能的缺失与许多免疫疾病以及器官发育有关。硬骨鱼中对HSP70的研究多局限于HSP70 mRNA对免疫刺激的响应以及细胞层面上HSP70蛋白对免疫刺激的响应。然而,在体情况下,HSP70蛋白如何响应免疫刺激还缺乏相应研究。此外,硬骨鱼中有关HSF1及其对HSP70的调节的研究也很匮乏。本论文首先验证了草鱼HSP70抗体的特异性,通过免疫组化方法研究发现,嗜水气单胞杆菌感染24 h的草鱼头肾淋巴细胞和中肾上皮细胞中HSP70蛋白表达均有显著上调,这种情况一直持续了72 h;脾脏中HSP70蛋白的表达在感染24 h后显著增多,在感染48 h时则与对照组无明显差异;同时,在肝脏中未能检测到HSP70蛋白的表达。这些结果不仅说明草鱼体内HSP70能快速参与免疫响应,而且在不同的器官中对免疫刺激的响应有所不同。此外,我们克隆了草鱼HSF1的编码区序列(Coding sequence,CDS)和HSP70启动子序列。草鱼HSF1序列全长1590 bp,共编码529个氨基酸。生物信息学分析发现,草鱼HSF1具有完整的DNA结合域、C端激活域和3个疏水区域。HSP70启动子序列含有5个热休克元件(Heat shock element,HSE)。结果表明,LPS诱导下,过表达HSF1能够显著上调HSP70 mRNA和蛋白的表达以及HSP70启动子的活性。有意思的是,在没有免疫刺激的情况下,仅过表达HSF1就能促进HSP70基因和蛋白的表达,这与哺乳动物中相关研究有所不同,显示出硬骨鱼中HSF1对HSP70的转录调控具有特异性。该研究初步探索了炎症情况下草鱼不同组织中HSP70的表达分布情况,并发现HSF1可直接参与HSP70的表达调控,为未来进一步阐明HSP70和HSF1的免疫功能提供了依据。
【学位授予单位】：电子科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S943

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本文编号：2750018