水产动物源气单胞菌耐药性与质粒介导喹诺酮类耐药研究

发布时间：2020-07-16 16:15

【摘要】：气单胞菌为条件致病菌,在水产养殖环境中普遍存在;喹诺酮类药物广泛用于水产养殖业,药物的不合理使用导致细菌耐药性问题严重化。质粒介导喹诺酮类耐药(Plasmid-mediated Quinolone Resistance,PMQR)是喹诺酮类耐药机制的重要组成部分,可引起药物低水平耐药。本文旨在分离鉴定水产动物源气单胞菌的基础上,采用微量肉汤二倍稀释法测定菌株对8大类22种常见抗菌药物的最小抑菌浓度(Minimal Inhibitory Concentration,MIC);采用PCR方法,检测分离菌株PMQR基因的携带情况并分析喹诺酮类耐药决定区(Quinolone Resistance Determining Region,QRDR)靶基因突变情况,同时提取PMQR阳性菌质粒,了解菌株携带质粒的情况;通过ERIC-PCR扩增分析PMQR阳性菌株的同源性。从1990~2014年采集于不同来源的患病水产动物中分离出116株气单胞菌,经分类鉴定,嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)有68株、维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)30株、豚鼠气单胞菌(Aeromonas caviae)7株、达卡气单胞菌(Aeromonas dhakensis)5株、简达气单胞菌(Aeromonas jandaei)4株、中间气单胞菌(Aeromonas media)1株以及温和气单胞菌(Aeromonas sobria)1株。临床分离的气单胞菌以嗜水气单胞菌为主。药物敏感性试验结果显示,分离菌株对阿莫西林/克拉维酸的耐药率为92.24%;对磺胺间甲氧嘧啶的耐药率为83.62%;对萘啶酸、土霉素、磺胺甲VA唑/甲氧苄啶和多西环素的耐药率介于25%~50%;对氯霉素、氟苯尼考、环丙沙星、恩诺沙星、新霉素、庆大霉素、阿米卡星、头孢噻肟和头孢曲松的耐药率在15%以下。28株(24.13%)气单胞菌出现多重耐药现象,从龟鳖类、经济价值较高且高密度养殖的鱼类分离的气单胞菌相对耐药。PCR检测结果显示,18株(15.52%)菌株携带PMQR基因,其中8株(6.90%)携带qnrS2基因,9株(7.76%)携带aac(6′)-Ib-cr基因,1株(0.86%)同时携带qnrS2和aac(6′)-Ib-cr基因;60株(51.72%)菌株发生QRDR的单突变或双突变;18株PMQR阳性菌株中,2株(11.11%)菌株的GyrA第83位点丝氨酸突变为异亮氨酸,9株(50%)菌株除了GyrA发生突变外,其ParC第80位点丝氨酸突变为异亮氨酸,7株无突变。18株PMQR基因阳性菌株中,11株菌株表现出对受试1种或以上喹诺酮类耐药。单独携带qnrS2基因的8株PMQR阳性菌中,除1株具有环丙沙星耐药表型外,其他7株均对所受试的3种喹诺酮类药物敏感,而且其gyrA和parC基因均不发生突变。携带aac(6')-Ib-cr基因的10株PMQR阳性菌中,除2株没有环丙沙星耐药表型外,其他8株均表现出对环丙沙星耐药,且有8株出现gyrA和parC双突变,2株出现gyrA的单突变。研究表明,嗜水气单胞菌是导致广东地区水产动物气单胞菌病害的主要病原菌;临床分离的水产源气单胞菌对受试抗菌药物产生不同程度的耐药,从龟鳖类、经济价值较高且高密度养殖的鱼类分离的气单胞菌相对耐药;qnrS2基因和aac(6')-Ib-cr基因在不同水产动物源气单胞菌中检出;携带aac(6')-Ib-cr基因的菌株均发生QRDR突变,并对NAL、CIP表现出耐药,单独携带qnrS2基因的菌株大部分不发生QRDR突变,但使CIP敏感性下降。研究结果为指导临床合理用药及阐明气单胞菌的喹诺酮类耐药机制提供理论依据。
【学位授予单位】：华南农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S941.4
【图文】：

结构图,喹诺酮类,结构图,兼性厌氧菌

抗菌谱比前三代大大提高，不仅对好氧或兼性厌氧菌有杀菌、衣原体和支原体引起的感染均有一定的疗效（Barrett，2000；S目前主要用于人类医疗上。4 代喹诺酮类的结构改变见图 1。

电泳图,电泳图,阳性对照,产物

SrRNA的PCR电泳图

电泳图,电泳图,气单胞菌,分离鉴定

gyrB的PCR电泳图

【参考文献】