水产病原菌快速检测技术及灭活疫苗开发

发布时间：2020-07-21 08:27

【摘要】：鳗弧菌(Vibrio anguillarum)和海豚链球菌(Strepstococcus iniae)是两种引起经济鱼类大菱鲆和罗非鱼大规模病害的高致死性病原菌,给水产养殖业带来了巨大的危害和经济损失。本课题基于抗体标记技术,以量子点CdSe/ZnS为标记物开发鳗弧菌量子点快速检测技术。在此基础上,基于对不同类型的佐剂的筛选,分别制备了鳗弧菌和海豚链球菌灭活疫苗,为鳗弧菌和海豚链球菌的病害防治工作奠定了基础。本课题以实验室分离的一株鳗弧菌毒株MVM425灭活菌体为抗原,制备出V.anguillarum高特异性单克隆抗体683-C5。以量子点材料标记该单克隆抗体,对传统斑点杂交技术进行改良,开发出高灵敏度V. anguillarum快速检测技术。该技术具有良好的特异性,与水产养殖常见病原菌无交叉反应,灵敏度达到1×103 CFU/ml,较V.anguillarum胶体金免疫层析试纸条检测结果提高了100倍。本课题通过筛选不同类型的佐剂制备了鳗弧菌的灭活疫苗,其中以寡糖H3作为免疫刺激剂的灭活疫苗效果最优,该疫苗在免疫后28天内保护率达到100%。以MONTANIDETM ISA 763A作为油佐剂的灭活疫苗效果次之,在免疫后60天内的保护率达到了85.2%。本课题分离鉴定了一株海豚链球菌S. iniae HT701,并以灭活S. iniae HT701菌体为抗原,利用大肠杆菌表达系统表达的海豚链球菌铁转运蛋白FtsB为免疫刺激剂,以美孚Marcol 52为佐剂,制备了S. iniae灭活疫苗。该疫苗免疫28天、60天后,对罗非鱼的保护率分别达到72%和65%。在此基础上,考察了疫苗免疫后罗非鱼血清中的抗体水平以及各组织中的转录水平变化。免疫后第二周MHC Ⅰ途径的转录水平较对照组上调了26.1倍,免疫后第四周,血清中抗体水平及杀菌活力较对照组分别上调了7.1及5.2倍,其结果与免疫保护率实验呈对应关系。以上研究表明,该疫苗具有良好的保护效果,为S. iniae灭活疫苗的开发提供了参考。
【学位授予单位】：华东理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S941.4

【参考文献】

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本文编号：2764165