松江鲈（Trachidermus fasciatus）肾细胞系的建立及生物学特性分析

发布时间：2020-09-05 10:47

　　本文研究了松江鲈(Trachidermus fasciatus)肾组织细胞系的建立过程,并分析了细胞生物学特性。结果表明组织块培养法适用于松江鲈肾的原代培养;在25℃、5%CO2培养箱中,原代培养启动24h后有细胞贴壁牢固,36h后有细胞迁出,30d后长满单层;主要为成纤维样细胞;采用胰酶消化法进行传代,传代细胞生长与分裂状态良好,20代后松江鲈肾5-6d便可长成单层,原代培养和早期培养时,培养液的成分是添加5ng/m L人碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)、20μg/m L硫酸软骨素、40ng/m LI型胰岛素样生长因子(IGF-I)的20%胎牛血清的DMEM/F12培养基;35代后,所有培养液为20%FBS-DMEM/F12。目前,松江鲈肾组织细胞已传至55代,成功建立松江鲈肾组织细胞系。经实验测定松江鲈肾组织细胞的群体倍增时间为别为56.32h,35代松江鲈肾组织细胞的核型分析结果是2n=40;核型公式为:14m+10sm+16t。病毒敏感性实验表明松江鲈肾组织细胞对鱼类诺达病毒不敏感,对鲤春病毒血症病毒敏感,测定病毒滴度为106.53TCID50/m L。松江鲈肾组织细胞在不同血清浓度(0%、5%、10%、15%、20%)、不同浓度硫酸软骨素(0、10、20、30、40μg/m L)、不同浓度人碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)(0、2.5、5、7.5、10ng/m L)以及不同浓度I型胰岛素样生长因子(IGF-I)(0、10、20、30ng/m L)条件下的生长特性研究结果表明:松江鲈肾组织细胞生长最适血清浓度为15%。最适硫酸软骨素的浓度为20μg/m L。最适IGF-Ⅰ的浓度为20ng/m L。最适b FGF的浓度为7.5ng/m L。本实验初步探索了草甘膦对松江鲈肾组织细胞的毒性效应,测定草甘膦对松江鲈肾组织细胞的24h半数抑制浓度为1177.66mg/L。微核实验表明:松江鲈肾组织细胞测试结果与对照组差异极显著。
【学位单位】：大连海洋大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2015
【中图分类】：S917.4
【部分图文】：

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图 1 松江鲈肾组织原代培养细胞Fig.1 kidney cells from rough skin sculpin in first passage量细胞从组织块迁出(48h)； B 组织块周围长满单层(6d)。标尺=100μ explant and outgrowth of a large number of cells(48h);B A mosurrounding tissue(6d).bar=100μm养组织细胞传代后生长与分裂状况良好，细胞透明，呈纤维样。代 20 代以后（图 2），细胞增殖速度加快，5~6d 可以长满单层素样生长因子（IGF-I）、人碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）和裂状况都未受到影响。目前松江鲈肾组织细胞已经传代到 55 细胞系。

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图 1 松江鲈肾组织原代培养细胞 cells from rough skin sculpin in firs迁出(48h)； B 组织块周围长满单层(6d)。utgrowth of a large number of cells(48surrounding tissue(6d).bar=100μm后生长与分裂状况良好，细胞透明，呈图 2），细胞增殖速度加快，5~6d 可以IGF-I）、人碱性成纤维细胞生长因子（到影响。目前松江鲈肾组织细胞已经传

松江鲈,肾组织,中期分裂,细胞的

第三章松江鲈肾组织细胞系生物学特性分析图 7 松江鲈肾组织细胞染色体数量分布图Fig.7 Number distribution of chromosome in rough skin sculpin kidne134368021010203040506070809035 36 37 38 39 40 41 42胞数细nmburefocles染色体数number of chromosomes

【参考文献】