一株海洋微藻的分离鉴定及环境因素对其生长的影响

发布时间：2020-10-20 22:19

　　 本实验自在青岛胶州凡纳滨对虾水泥养殖池塘中采集到1株生长稳定,环境突变后恢复能力强的微藻(NQD201401),对其进行了分离和鉴定,探究了温度、光照、盐度以及营养条件对该株藻生长的影响,并初步研究了其固定化保存的工艺条件。经16SrDNA基因序列测定,并通过在NCBI上进行BLAST比对,结果显示该藻株(NQD201401)与微拟球藻(Nannochoropsis qaditana)相似性到达100%；系统进化树构建与分析结果与NCBI上比对结果一致。单因素温度、光照、盐度实验结果表明,该藻株最适生长宜温度(27士1)℃、盐度20、光照120μmol·m-2s-1;以此最适生长条件设计实验,利用Design Expert8.0软件,以温度、盐度、光照为自变量,以最终藻的数量为因变量进行综合培养实验;实验所得数据输入Design Expert 8.0软件,进行响应面模型分析,得到回归方程如下：Y=2.58613-0.34148xX1+0.15582×X2+0.31539×X3+0.025695×X1×X2+0.17847xX1× X3+0.046528×X2×X3-0.54675xX12-0.27668×X22-0.35721×X32(R2=0.8655)该回归方程中Y值为响应值(藻细胞数量),X1、X2、X3分别代表温度、盐度和光照。优化结果显示,在培养液为f/2时,该藻在温度25.8℃、盐度23、光照140μmol·m-2s-1时藻细胞可达到最大密度,最大值可为(2.714±0.925)×107cell/mL。不同氮磷含量对该株藻生长的影响实验结果提示：在环境磷浓度小于0.11mg/L时,该藻生长受到限制；环境氮水平对该株藻的生长影响较小,当氮磷比为1.8 (NaNO37.5gm/L, NaH2PO444mg/L)时该株藻生长最好。铁元素对该株藻生长影响实验结果表明：柠檬酸铁含量39mg/L时藻的生长密度最大,在柠檬酸铁含量为390mg/L时,该藻生长缓慢,明显受到抑制,而在0.39mg/L时,藻达到稳定期时间短,但藻细胞密度低。锰元素对该株藻生长影响实验结果表明,MnCl2·4H2O0.178mg/L时,藻细胞密度最大,生长速率最快。进行了加的斯微拟球藻(N. qaditana) NQD201401固定化实验,初步探究了不同海藻酸钠、聚乙烯醇对固定化小球的影响,获得其最佳条件为海藻酸钠6%,在3%的CaCl2溶液中固定30min,最大包埋藻细胞数量为106cell/mL
【学位单位】：中国海洋大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2015
【中图分类】：S917.3
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 综述
    1 前言
        1.1 微藻在生态系统中的作用
        1.2 微藻对养殖环境中的水质影响
        1.3 微藻对养殖水体中病害的影响
        1.4 营养元素对微藻生长的作用
            1.4.1 氮、磷对微藻的生长的作用与影响
            1.4.2 微量元素对微藻生长的作用与影响
        1.5 环境因素对微藻生长的影响
    2 微藻的分离提纯与无菌化方法的简介
        2.1 微藻的分离提纯方法
            2.1.1 平板分离法
            2.1.2 微吸管分离法
            2.1.3 96孔板分离法
            2.1.4 水滴分离法
        2.2 微藻的无菌化
            2.2.1 物理方法
            2.2.2 化学方法
    3 微藻的鉴定
        3.1 传统鉴定方法
            3.1.1 形态学分类方法
            3.1.2 色素体分类方法
        3.2 分子鉴定法
    4 藻种的保存及固定化
        4.1 藻种保存方法
        4.2 微藻的固定化
    5 本实验研究的目的及意义
第二章 养殖池塘藻类种群变动与优势藻
    1 前言
    2 采样调查
        2.1 采样地点
        2.2 采样时间和模式
        2.3 样品计数与分类方法
    3 采样结果
    4 讨论
第三章 微藻的分离与鉴定
    1 优势藻种的分离
        1.1 实验材料
        1.2 分离提纯方法
    2 分子生物学分类鉴定
        2.1 微藻样本测序
        2.2 微藻鉴定结果
            2.2.1 系列分析
            2.2.2 进化树的构建
    3 讨论
第四章 温度、光照、盐度与营养元素对加的斯微拟球藻(N.gaditana)NQD201401的生长的影响
    1 引言
    2 温度、光照、盐度实验
        2.1 试验材料
        2.2 实验设计
        2.3 实验方法
            2.3.1 温度实验方法
            2.3.2 光照实验方法
    3 实验结果
        3.1 温度实验
        3.3 盐度实验
    4 培养条件优化分析
        4.1 实验材料
        4.2 实验设计
        4.3 数据处理
    5 营养元素对微拟球藻(NQD201401)生长的影响
        5.1 引言
        5.3 实验结果
    6 最佳生长条件下藻株的生长
        6.1 实验方法
        6.2 实验结果
    7 讨论
第五章 微拟球藻的固定化技术初探
    1 引言
    2 包埋小球的制做
        2.1 实验材料
        2.2 实验设计
        2.3 实验方法
        2.4 实验结果与分析
    3 包埋藻量选择
        3.1 实验材料
        3.2 实验设计
        3.3 实验方法
        3.4 数据处理
        3.5 实验结果
        3.6 讨论
参考文献
附件
致谢
个人简历

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本文编号：2849228