B-类清道夫受体和C-型凝集素在日本囊对虾先天免疫中的功能研究
发布时间：2020-12-04 08:41
模式识别受体（PRRs）在先天免疫中起着不可替代的作用,通过识别各种“自已”和“非已”成分,把这种信息传导给下游的效应分子,有的模式识别受体可以直接发挥功能,清除异已成分。清道夫受体（SRs）和C-型凝集素（CTLs）都是模式识别受体中非常重要的成员,本研究选取日本囊对虾（Marsupenaeus japonicus）为实验动物,研究了一种B类清道夫受体MjSR-B1和一个含有卷曲螺旋结构域的C-型凝集素MjcLec在先天免疫中的作用。1.日本囊对虾B类清道夫受体MjSR-B1的功能研究清道夫受体通过识别病原相关分子模式（PAMPs）参与先天免疫,同时通过识别损伤相关分子模式（DAMPs）参与疾病的发生。虽然在脊椎动物中清道夫受体已经得到深入研究,但是它们在无脊椎动物先天免疫中的作用仍需要进一步阐明。我们从日本囊对虾中鉴定出一种B类清道夫受体,命名为MjSR-B1。 MjSR-B1主要分布在血细胞、心脏、肝胰腺中,在受到鳗弧菌和金黄色葡萄球菌刺激以后,对虾血细胞中的MjSR-B1的mRNA表达水平上调。MjSR-B1胞外结构域的重组蛋白rMjSR-B1可以凝集革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌...
【文章来源】：山东大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：76 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１．２清道夫受体的结构示意图
２．?ＭｊＳＲ－Ｂｌ的组织分布和隶法模式??用ｑＲＴ－ＰＣ民分析ＭｊＳＲ－Ｂｌ的组织分布。结果表明ＭｊＳＲ－Ｂｌ主要表达在血细??胞、屯、脏和肝膜腺中，而飯、胃和肠中则几乎没有表达（图２．４Ａ）。ＭｊＳＲ－Ｂｌ在??血中受到輯弧菌和金黄色葡萄球菌刺激后的表达模式也用ｑＲＴ－ＰＣ艮检测。图??２．４Ｂ表明ＭｊＳ民－Ｂ１的表达水平在受到自曼弧菌刺激Ｗ后２?ｈ和４８?ｈ上调，而受到??金黄色葡萄球菌刺激Ｗ后从２?ｈ?—直到４８?ｈ都昆著上调（图２．４Ｃ）。??Ａ?２。［??！祉??０?ｑＬＷＬＭＩ?ＷＩ?■?—ｉ?？—??己?口?ＰＢＳ?Ｃ??３「?＊?Ｂ５Ｉ?Ｖ．?ａｎｇｕｉＨａｒｕｍ?１〇．?＇?＇?ＰＢＳ??Ｉ＊?ｇ?＊?■■?Ｓ．ａｕｒｅｕｓ??ｎｉ?ＩＪ?Ｃ?ｎｉ?Ｌｌ?Ｌ??ｎ；＾?矿々令护?公护护??Ｔｉｍｅ?ｐｏｓｔ?ｃｈａｌｌｅｎｇｅ?Ｔｉｍｅ?ｐｏｓｔ?ｃｈａｌｌｅｎｇｅ??图２．４?ＭｊＳ民－Ｂ１的表达模式。（Ａ）?ＭｊＳＲ－Ｂｌ的组织分布用ｑＲＴ－ＰＣ民检ｉｉ，ｐ－ａｃｄｎ作为内参。??（Ｂ和Ｃ）对邮受到媛弧菌和金黄色葡萄球苗刺激Ｗ后ＭｊＳＲ－Ｂｌ在血细胞中的表达模式分??析
２．５Ａ），这个重组蛋白包括ＭｊＳＲ－Ｂｌ的胞外结构域（４６．９０?ｋＤａ）和陆ｓ－ｔａｇ标签??（２２．８ｋＤａ），所Ｗ总的分子量在７０ｋＤａ左右，大小符合预期。ｒＭｊＳＲ－Ｂｌ可Ｗ凝??集八种不同的细菌，凝集作用依赖于巧离子（图２．５Ｂ），最小凝集浓度（ＭＡＣ）??如表２．２所示。??Ａ?Ｂ??Ｈｉｓ－ｔａｇ?Ｈｉｓ＿ｔａｇ?＋?Ｃａ。＊??１?化．０?——??６６．２?．申編??Ｗ?ｎ??？?ｒＭｊＳＲ－Ｂ１?ｒＭｊＳＲ－Ｂ１?＋?Ｃａ；＊??－?ｍｍ??Ｍ?１?２?３臨－＇呼一鄕??ｍｍｉ?Ｕ?劍??图２．５ＭｊＳＲ－Ｂｌ凝集细菌。（Ａ）?ＭｊＳＲ－Ｂｌ胞外结构域的重组表达和纯化。用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检??测ｒＭｊＳ民－Ｂ１在大肠杆菌中的表达。泳道Ｍ表示蛋白分子量标准，泳道１表示诱导前含??ｐＥＴ－３２ａ－ＭｊＳＲ－Ｂｌ的大肠杆菌，泳道２表示ＩＰＴＧ诱导后的大肠杆菌，泳道３表示纯化后的??ＭｊＳＲ－Ｂｌ。（Ｂ）重组表达的ＭｊＳＲ－Ｂｌ凝集细菌。图中出示的是媛孤菌的凝集效果。ｐＥＴ－３２ａ（＋）??标签蛋白作为对照。??Ｆｉｇ．?２．５?ＭｊＳＲ－Ｂｌ?ａｇｇｌｕｔｉｎａｔｅｄ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｂａｃｔｅｒｉａ．?（Ａ）?Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ａｎｄ?ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ??ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ?ｒｅｇｉｏｎ?ｏｆ?ＭｊＳＲ－Ｂｌ．?ＳＤＳ－ＰＡＧＥ?ｗａｓ?ｕｓｅｄ?ｔｏ?ｌｅｓｔ?也ｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ｒＭｊＳＲ－Ｂｌ?ｉｎ?Ｅ．??Ｉ?？??ｃｏｌＬ?Ｌａｎｅ?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｍａｒｋｅｒ；?Ｌａｎｅ?１
本文编号：2897300
【文章来源】：山东大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：76 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１．２清道夫受体的结构示意图
２．?ＭｊＳＲ－Ｂｌ的组织分布和隶法模式??用ｑＲＴ－ＰＣ民分析ＭｊＳＲ－Ｂｌ的组织分布。结果表明ＭｊＳＲ－Ｂｌ主要表达在血细??胞、屯、脏和肝膜腺中，而飯、胃和肠中则几乎没有表达（图２．４Ａ）。ＭｊＳＲ－Ｂｌ在??血中受到輯弧菌和金黄色葡萄球菌刺激后的表达模式也用ｑＲＴ－ＰＣ艮检测。图??２．４Ｂ表明ＭｊＳ民－Ｂ１的表达水平在受到自曼弧菌刺激Ｗ后２?ｈ和４８?ｈ上调，而受到??金黄色葡萄球菌刺激Ｗ后从２?ｈ?—直到４８?ｈ都昆著上调（图２．４Ｃ）。??Ａ?２。［??！祉??０?ｑＬＷＬＭＩ?ＷＩ?■?—ｉ?？—??己?口?ＰＢＳ?Ｃ??３「?＊?Ｂ５Ｉ?Ｖ．?ａｎｇｕｉＨａｒｕｍ?１〇．?＇?＇?ＰＢＳ??Ｉ＊?ｇ?＊?■■?Ｓ．ａｕｒｅｕｓ??ｎｉ?ＩＪ?Ｃ?ｎｉ?Ｌｌ?Ｌ??ｎ；＾?矿々令护?公护护??Ｔｉｍｅ?ｐｏｓｔ?ｃｈａｌｌｅｎｇｅ?Ｔｉｍｅ?ｐｏｓｔ?ｃｈａｌｌｅｎｇｅ??图２．４?ＭｊＳ民－Ｂ１的表达模式。（Ａ）?ＭｊＳＲ－Ｂｌ的组织分布用ｑＲＴ－ＰＣ民检ｉｉ，ｐ－ａｃｄｎ作为内参。??（Ｂ和Ｃ）对邮受到媛弧菌和金黄色葡萄球苗刺激Ｗ后ＭｊＳＲ－Ｂｌ在血细胞中的表达模式分??析
２．５Ａ），这个重组蛋白包括ＭｊＳＲ－Ｂｌ的胞外结构域（４６．９０?ｋＤａ）和陆ｓ－ｔａｇ标签??（２２．８ｋＤａ），所Ｗ总的分子量在７０ｋＤａ左右，大小符合预期。ｒＭｊＳＲ－Ｂｌ可Ｗ凝??集八种不同的细菌，凝集作用依赖于巧离子（图２．５Ｂ），最小凝集浓度（ＭＡＣ）??如表２．２所示。??Ａ?Ｂ??Ｈｉｓ－ｔａｇ?Ｈｉｓ＿ｔａｇ?＋?Ｃａ。＊??１?化．０?——??６６．２?．申編??Ｗ?ｎ??？?ｒＭｊＳＲ－Ｂ１?ｒＭｊＳＲ－Ｂ１?＋?Ｃａ；＊??－?ｍｍ??Ｍ?１?２?３臨－＇呼一鄕??ｍｍｉ?Ｕ?劍??图２．５ＭｊＳＲ－Ｂｌ凝集细菌。（Ａ）?ＭｊＳＲ－Ｂｌ胞外结构域的重组表达和纯化。用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检??测ｒＭｊＳ民－Ｂ１在大肠杆菌中的表达。泳道Ｍ表示蛋白分子量标准，泳道１表示诱导前含??ｐＥＴ－３２ａ－ＭｊＳＲ－Ｂｌ的大肠杆菌，泳道２表示ＩＰＴＧ诱导后的大肠杆菌，泳道３表示纯化后的??ＭｊＳＲ－Ｂｌ。（Ｂ）重组表达的ＭｊＳＲ－Ｂｌ凝集细菌。图中出示的是媛孤菌的凝集效果。ｐＥＴ－３２ａ（＋）??标签蛋白作为对照。??Ｆｉｇ．?２．５?ＭｊＳＲ－Ｂｌ?ａｇｇｌｕｔｉｎａｔｅｄ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｂａｃｔｅｒｉａ．?（Ａ）?Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ａｎｄ?ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ??ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ?ｒｅｇｉｏｎ?ｏｆ?ＭｊＳＲ－Ｂｌ．?ＳＤＳ－ＰＡＧＥ?ｗａｓ?ｕｓｅｄ?ｔｏ?ｌｅｓｔ?也ｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ｒＭｊＳＲ－Ｂｌ?ｉｎ?Ｅ．??Ｉ?？??ｃｏｌＬ?Ｌａｎｅ?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｍａｒｋｅｒ；?Ｌａｎｅ?１
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