东北淡水鱼低温特征腐败菌分析及其群体信号分子检测研究

发布时间：2020-12-06 13:43

　　群体感应现象是指细菌产生自诱导物或信号分子进入环境中,通过感知细菌群体密度,从而开启特定基因的表达机制。革兰氏阴性菌产生的最常见的信号分子为N-酰基-L-高丝氨酸内酯（N-acyl-L-homoserine lactones,AHLs）。在淡水鱼腐败菌中,AHLs能够调节腐败菌的浓度,并提高腐败菌的腐败能力,加速鱼肉的腐败过程。检测腐败菌的AHLs对研究鱼肉腐败有着重要的作用。本文以鱼肉腐败过程中特征腐败菌产AHLs的含量变化为研究对象,应用PCR-DGGE技术从东北淡水鱼中筛选出在低温条件下鱼肉到达腐败点时的特征腐败菌;通过荧光染色、流式测定及透射电镜等方法确定AHLs能够诱导肥大细胞产生特异性反应;通过海藻酸钠和氧化石墨烯形成生物相容性材料成功构建传感模型,将其与肥大细胞电化学传感技术相结合对3种AHLs标品进行快速检测,绘制标准曲线;同时模拟鱼肉腐败过程,对腐败鱼肉中的AHLs进行检测。为淡水鱼腐败过程中AHLs检测提供新的理论和依据,为AHLs的常规检测提供了一种新型的、精确的检测方法。本文主要研究方法和结果如下:1.以东北三种淡水鱼—鳙鱼、鲫鱼和鲤鱼为研究对象,应用PCR-D... 

【文章来源】：扬州大学江苏省

【文章页数】：53 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图２－２?１６Ｓ?ｒＤＮＡ?Ｖ３区ＰＣＲ扩增产物电泳结果??Ｆｉｇ．２－２?ＰＣＲ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?１６Ｓ?ｒＤＮＡ－Ｖ３??

２．３结果与分析??２．３．１?ＰＣＲ扩增结果??以２７Ｆ和１４９２Ｒ为引物的一次扩增产物大小为１５００?ｂｐ左右（图２－１），以３３８Ｆ和??５１８Ｒ为引物的二次扩增产物大小为１９０?ｂｐ左右（图２－２），所有样品均有较亮的扩增条带。??本实验的ＰＣＲ扩增条件合适，用于后续的ＤＧＧＥ电泳分析。??Ｍ?１?２?３?４?５?６?７?８?９?１０?１１?１２??２００擎?＇??图２－１?１６Ｓ?ｒＤＮＡＰＣＲ扩增产物电泳结果??Ｆｉｇ．２－１?ＰＣＲ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?１６Ｓ?ｒＤＮＡ??Ｍ?１?２?３?４?５?６?７?８?９?１０?１１?１２??图２－２?１６Ｓ?ｒＤＮＡ?Ｖ３区ＰＣＲ扩增产物电泳结果??Ｆｉｇ．２－２?ＰＣＲ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?１６Ｓ?ｒＤＮＡ－Ｖ３??注：泳道Ｍ为ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ，１？４为鑛鱼样品，５？８为觸鱼样品，９？１２为鍵鱼样品，每种样品分别对??新鲜点和腐败点取样，每个时间点２个平行。??

ｃ?〇??图３－１３种八吼５信号分子对肥大细胞凋亡的荧光观察（八）对照组；（８）１０｜＾〇４－吧１＾ＨＳＬ；?（Ｄ）?１０ｎＭ３ＯＣｉ２－ＨＳＬ??Ｆｉｇ．３－１?Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ?ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ?ｉｍａｇｅｓ?ｏｆ?ｍａｓｔ?ｃｅｌｌ?ｗｉｔｈ?ｔｈｒｅｅ?ＡＨＬｓ．?（Ａ）?ｃｏｎｔｒｏｌ．?（Ｂ）?１０｜ｉ１０ｐＭ?Ｃ６－ＨＳＬ．?（Ｄ）?１０［ｉＭ?３ＯＣ１２－ＨＳＬ??

【参考文献】：
期刊论文
[1]辽宁省淡水鱼中孔雀石绿残留量检测[J]. 崔松林.  安徽农业科学. 2014(13)
[2]气相色谱-质谱法检测细菌中N-酰基高丝氨酸内酯类信号分子[J]. 郭秀春,郑立,张魁英,徐鲁燕,王小如.  分析测试学报. 2012(03)
[3]深入贯彻中央精神 加快推进“十二五”现代渔业建设[J]. 牛盾.  中国渔业经济. 2011(01)
[4]高效液相色谱-串联质谱法同时测定细菌群体感应效应的11种AHLs类信号分子[J]. 马晨晨,李柏林,欧杰,王婧,赵俊虹.  分析化学. 2010(10)
[5]南美白对虾冰温下菌相变化[J]. 郭红,董士远,刘尊英,赵元晖,曾名湧.  中国海洋大学学报(自然科学版). 2010(06)
[6]鱼源假单胞菌群体感应信号分子与腐败特性相关关系的研究[J]. 綦国红,董明盛,陈晓红,姜梅.  中国农业科学. 2007(07)
[7]淡水鱼工业化生产的探讨[J]. 陈奇,袁木平.  食品与机械. 2005(01)

硕士论文
[1]淡水鱼中耐冷菌菌群分析与特征腐败菌生物学特性研究[D]. 高祥英.扬州大学 2015
[2]冷藏养殖大黄鱼特定腐败菌及其群体感应信号分子DKPs鉴定与功能的研究[D]. 顾清清.浙江工商大学 2013



本文编号：2901475