三角帆蚌3个贝壳基质蛋白基因的克隆及功能分析

发布时间：2020-12-07 00:39

　　三角帆蚌（Hypriosis cumingii）是我国特有的淡水育珠蚌,所产淡水珍珠产量约占总产量的80%以上。珍珠和贝壳是由碳酸钙组成,经生物矿化过程形成。基质蛋白在生物矿化产物的形成中起了十分重要的作用。对基质蛋白的鉴定和研究可以帮助我们更好地了解贝壳和珍珠的形成机理。本文从三角帆蚌外套膜中克隆和鉴定了3个新的基质蛋白基因,分别是silkmaxin和hic6,hic7,分析了这3个基因对珍珠的形成结构和功能上所起的作用。从三角帆蚌外套膜中克隆得到新的基质蛋白基因silkmaxin,hic7和hic6,silkaxin基因的cDNA序列,全长1151bp,ORF为885bp,共编码294个氨基酸包含前面15个信号肽,消除信号肽以后的理论分子量和等电点分别为28.39kDa,9.52,说明此蛋白为一碱性蛋白。Hic7基因的cDNA序列全长为459bp,ORF 240bp,加上前19个信号肽共编码了79个氨基酸,消除信号肽的理论等电点为6.12,理论分子量为6.80kDa。Hic6基因的cDNA全长为449bp,其中ORF为219bp,共编码了73个氨基酸包含前20个信号肽,消除信号肽后... 

【文章来源】：上海海洋大学上海市

【文章页数】：75 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
引言
第一章 贝类生物矿化的研究进展
    1.1 生物矿化概述
        1.1.1 生物矿化
        1.1.2 生物矿化的分类
        1.1.3 研究生物矿化的意义
    1.2 贝类的生物矿化
        1.2.1 贝壳结构
        1.2.2 贝壳角质层形成
        1.2.3 贝壳棱柱层形成
        1.2.4 贝壳珍珠层的形成和生长机制
        1.2.5 贝壳的有机组成
        1.2.6 贝壳基质蛋白的研究
    1.3 分子生物学育种
        1.3.1 分子育种
        1.3.2 有关珍珠颜色基因的研究
    1.4 总结与展望
第二章 三角帆蚌类丝状基质蛋白silkmaxin基因的克隆及其在生物矿化中的作用
    2.1 材料和方法
        2.1.1 实验材料
        2.1.2 实验方法
    2.2 结果分析
        2.2.1 cDNA克隆及序列分析
        2.2.2 蛋白结构预测
        2.2.3 组织荧光定量分析
        2.2.4 silkmaxin 的原位杂交检测
        2.2.5 silkmaxin 在珍珠囊形成过程中的表达
        2.2.6 RNA干扰实验及荧光定量分析
    2.3 讨论
第三章 参与珍珠形成的三角帆蚌富含半胱氨酸的贝壳基质蛋白hic7 基因
    3.1 材料和方法
        3.1.1 实验材料
        3.1.2 实验方法
    3.2 结果
        3.2.1 cDNA克隆及序列分析
        3.2.2 蛋白结构预测
        3.2.3 组织荧光定量分析
        3.2.4 原位杂交
        3.2.5 在珍珠囊形成过程中的表达
        3.2.6 RNA干扰
    3.3 讨论
第四章 三角帆蚌贝壳基质蛋白hic6基因的克隆和功能鉴定以及对珍珠层颜色性状的关联性分析
    4.1 材料和方法
        4.1.1 实验材料
        4.1.2 实验方法
    4.2 结果分析
        4.2.1 基因克隆
        4.2.2 蛋白结构预测
        4.2.3 组织荧光定量分析
        4.2.4 原位杂交
        4.2.5 在珍珠囊形成过程中基因hic6 的表达
        4.2.6 RNA干扰试验
        4.2.7 SNP位点筛选
        4.2.8 多态性分析
        4.2.9 三角帆蚌hic6 SNPs位点与内壳色性状关联分析
        4.2.10 三角帆蚌hic6基因的SNP位点单倍型分析
    4.3 讨论
结论
参考文献
致谢



本文编号：2902294