爱德华氏菌FabR调控海水环境适应、脂肪酸代谢与毒力的机制
发布时间：2020-12-13 13:04
杀鱼爱德华氏菌（Edwardsiella piscicida）会引起严重的鱼类爱德华氏菌病,给世界水产养殖带来严重损害。本课题利用转座子插入测序（TIS）技术,探究了E.piscici a在冬季（16℃）和夏季（28℃）的海水中存活的决定性遗传因子。TIS数据表明,E.piscicida基因组上编码的71个基因在16℃海水中显示其必需性,包括代谢系统,转运系统和Ⅲ型分泌系统（T3SS）;63个基因在28℃海水中显示其必需性,包括转录、翻译、能量代谢和能量转化相关的基因。其中,脂肪酸代谢调控因子编码基因fadR同时在16℃和28℃条件下显示其必需性,而fabR插入突变后在16℃和28℃条件下存活能力增强,说明脂肪酸代谢和E.piscicid 在自然海水条件下存活密切相关。基于上述TIS筛选结果,本课题进一步利用ChIP-seq、RNA-seq和质谱等技术,探究脂肪酸代谢核心调控因子FabR调控不同脂肪酸组成和比例的分子机制,以及脂肪酸代谢和E.piscicida毒力表达之间的关系。FabR通过直接结合fabA、fabB和cfa讲启动子区域,抑制fabA、fabB和cfa的表达,进而调控脂...
【文章来源】：华东理工大学上海市 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：75 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１．５肠聚集性大肠杆菌Ｔ６ＳＳ示意图网??Ｆｉｇ．?１．５?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｅｎｔｅｒｏａｇｇｒｅｇａｔｉｖｅ?Ｅ．?ｃｏｌｉ?Ｔ６ＳＳＪ２０１??
Ｆｉｇ．?１．６?Ｔｈｅ?ｃｌｕｓｔｅｒ?ｏｆ?Ｔ６ＳＳ?ｏｆ?Ｅ．?ｐｉｓｃｉｃｉｄａ??１．２．３杀鱼爱德华氏菌Ｔ３／Ｔ６ＳＳ介导的毒力调控网络??Ｔ３ＳＳ和Ｔ６ＳＳ的表达在胞内受到严格调控作用（图１．７）。其中Ｆｕｒ可以感受Ｆｅ２＋的浓??度进而调控Ｔ６ＳＳ；?ＲｐｏＳ可以响应胞外环境中ｐＨ和氧压力，并且通过抑制表达抑??制Ｔ３／Ｔ６ＳＳ的表达［２４］。ＥｓｒＡ和ＥｓｒＢ双组分系统也对于Ｔ３／Ｔ６ＳＳ的表达起到重要作用。??ＥｓｒＡ通过感受胞外的信号，磷酸化并激活胞内的ＥｓｒＢ，进而调控Ｔ３ＳＳ的表达［２５］。ＥｓｒＣ??除了直接调控Ｔ３ＳＳ基因的表达，还结合在ｅｖｐＰ和ｅｖ＃启动子上从而调控??Ｔ６ＳＳ的表达。同样，双组分系统ＰｈｏＰ和ＰｈｏＱ也对于Ｔ３／Ｔ６ＳＳ的表达起到促进作用。??ＰｈｏＱ可以感受胞外的Ｍｇ２＋的浓度、温度、溶解氧和ｐＨ，进而磷酸化响应调节子ＰｈｏＰ??的表达，激活表达并调控Ｔ３／Ｔ６ＳＳ表达。因此，ＥｓｒＢ和ＥｓｒＣ是Ｔ３／Ｔ６ＳＳ核心调??控因子。通过各种技术发现新的胞内外信号分子以及相应信号转导途径对于深入理解??Ｔ３／Ｔ６ＳＳ介导的毒力调控网络具有重要意义。??１．３转座子插入突变体文库测序??１．３．１转座子插入突变株文库??转座子插入突变体文库是由转座子随机插入到受体菌株基因组中后形成的突变株??集合。目前已有不同种类的转座子如Ｔｎ９１６、Ｔｎ４００１、ＴｎｌＯ、Ｔｎ５、Ｔｎ９］７和ＩＳＳ１等被??用于构建转座子插入突变体。Ｔｎ９１６转座子优选插入富含Ａ的位点序列，该序列由富含??Ｔ序列的六碱基分开。ＴｎｌＯ转座子插入含有６?ｂｐ的特异性靶序列
Ｔ６ＳＳ??ｅｖｐＰ?ｅｖｐＡ?ＢＣＤＥＦＧＨＩ?ＪＫＬＭ?Ｎ??图１．６杀鱼爱德华氏菌Ｖ丨型分泌系统基因簇??Ｆｉｇ．?１．６?Ｔｈｅ?ｃｌｕｓｔｅｒ?ｏｆ?Ｔ６ＳＳ?ｏｆ?Ｅ．?ｐｉｓｃｉｃｉｄａ??１．２．３杀鱼爱德华氏菌Ｔ３／Ｔ６ＳＳ介导的毒力调控网络??Ｔ３ＳＳ和Ｔ６ＳＳ的表达在胞内受到严格调控作用（图１．７）。其中Ｆｕｒ可以感受Ｆｅ２＋的浓??度进而调控Ｔ６ＳＳ；?ＲｐｏＳ可以响应胞外环境中ｐＨ和氧压力，并且通过抑制表达抑??制Ｔ３／Ｔ６ＳＳ的表达［２４］。ＥｓｒＡ和ＥｓｒＢ双组分系统也对于Ｔ３／Ｔ６ＳＳ的表达起到重要作用。??ＥｓｒＡ通过感受胞外的信号，磷酸化并激活胞内的ＥｓｒＢ，进而调控Ｔ３ＳＳ的表达［２５］。ＥｓｒＣ??除了直接调控Ｔ３ＳＳ基因的表达，还结合在ｅｖｐＰ和ｅｖ＃启动子上从而调控??Ｔ６ＳＳ的表达。同样，双组分系统ＰｈｏＰ和ＰｈｏＱ也对于Ｔ３／Ｔ６ＳＳ的表达起到促进作用。??ＰｈｏＱ可以感受胞外的Ｍｇ２＋的浓度、温度、溶解氧和ｐＨ，进而磷酸化响应调节子ＰｈｏＰ??的表达，激活表达并调控Ｔ３／Ｔ６ＳＳ表达。因此，ＥｓｒＢ和ＥｓｒＣ是Ｔ３／Ｔ６ＳＳ核心调??控因子。通过各种技术发现新的胞内外信号分子以及相应信号转导途径对于深入理解??Ｔ３／Ｔ６ＳＳ介导的毒力调控网络具有重要意义。??１．３转座子插入突变体文库测序??１．３．１转座子插入突变株文库??转座子插入突变体文库是由转座子随机插入到受体菌株基因组中后形成的突变株??集合。目前已有不同种类的转座子如Ｔｎ９１６、Ｔｎ４００１、ＴｎｌＯ、Ｔｎ５、Ｔｎ９］７和ＩＳＳ１等被??用于构建转座子插入突变体。Ｔｎ９１６转座子优选插入富含Ａ的位点序列
本文编号：2914583
【文章来源】：华东理工大学上海市 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：75 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１．５肠聚集性大肠杆菌Ｔ６ＳＳ示意图网??Ｆｉｇ．?１．５?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｅｎｔｅｒｏａｇｇｒｅｇａｔｉｖｅ?Ｅ．?ｃｏｌｉ?Ｔ６ＳＳＪ２０１??
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