光棘球海胆酚氧化酶的生物化学和酶学特性的研究
发布时间：2020-12-17 11:28
本文通过线性连续梯度非变性电泳结合邻苯二酚发色法分离纯化了光棘球海胆（Strongylocentrotus nudus）体腔液上清中的酚氧化酶（PO）。结果显示:光棘球海胆体腔液上清中存在3种PO,在聚丙烯酰胺凝胶中与邻苯二酚反应分别呈现褐色、黄色和紫色,根据其分子质量从高到低依次命名为SnPO1,SnPO2和SnPO3。分析研究了PO的最适温度和pH、底物特异性、动力学参数、金属离子和抑制剂对酶活的影响。结果显示:光棘球海胆PO可有效氧化左旋多巴（L-DOPA）、多巴胺和对苯二酚,但不能氧化酪氨酸,表明该酶可催化邻二酚和对二酚类底物而不能催化单酚类底物,属于漆酶型酚氧化酶;SnPO1,SnPO2和SnPO3的最适温度分别为75℃、70℃和40℃,最适pH分别为7.0、9.0和8.0;光棘球海胆PO在沸水中孵育60min后活力显著增强表明SnPO1,SnPO2和SnPO3是嗜熱的;SnPO1活力可被Cu2+、Mn2+和Fe2+显著增强,被Pb2+、Cd2+、EDTA、DETC、亚硫酸钠和抗坏血酸抑制,而SnPO2和SnPO3却受Pb2+和Cd2+影响不大,表明这三种酚氧化酶是含铜的,并...
【文章来源】：大连海洋大学辽宁省
【文章页数】：33 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
光棘球海胆体腔液上清非变性电泳图
13图2 温度和pH对光棘球海胆PO活力的影响Fig. 2. The effects of temperature and pH on the proteins with PO-like activities in S. nudus. (A) The optimumtemperature of SnPOs. (B) Thermostable analysis of SnPOs. (C) The optimum pH of SnPOs. Values withdifferent letters indicate significant differences (P < 0
14图3 二价金属离子和抑制剂对光棘球海胆PO活力的影响Fig. 3. The effects of divalent metal ions and inhibitors on the proteins with PO-like activities in S. nudus. (A)The effects of metal ions on SnPO1; (B) The effects of metal ions on SnPO2; (C) The effects of metal ions onSnPO3; (D) The effects of inhibitors on the proteins with PO-like activities in S. nudus. Values from metal ion orinhibitor treatments with an asterisk indicate a significant difference (P < 0.05) compared with controls.A：二价金属离子对光棘球海胆PO1活力的影响；2：二价金属离子对光棘球海胆PO2活力的影响；3：二价金属离子对光棘球海胆PO3活力的影响；4：抑制剂对光棘球海胆PO活力的影响3.讨论线性连续梯度非变性电泳结合邻苯二酚发色法共检测出三个蛋白条带，根据分子量从高到低依次命名为SnPO1, SnPO2和SnPO3（如图1）。在这三个蛋白条带中，SnPO1相对分子质量小于21 kDa，SnPO2的电泳迁移速度平行于溴酚蓝，SnPO3的电泳迁移速度大于溴酚蓝。在海洋无脊椎动物中极小的酚氧化酶的分子量是不常见的，在线性连续梯度非变性电泳中酚氧化酶的分子量一般大于100 kDa[12，56]。在与儿茶酚反应后，SnPO1和SnPO2都呈黄色
【参考文献】：
期刊论文
[1]不同性别光棘球海胆(Strongylocentrotus nudus)性腺蛋白质组差异分析[J]. 湛垚垚,黄显雅,沈妍,刘伟,穆琳琳,郝振林,王轶南,丁君,常亚青. 海洋与湖沼. 2013(06)
[2]菲律宾蛤仔(Ruditapes philippinarum)漆酶型酚氧化酶的纯化及特性分析[J]. 蒋经伟,邢婧,战文斌. 海洋与湖沼. 2012(02)
[3]虾夷马粪海胆(Strongylocentrotus intermedius)体腔液的酚氧化酶活性分析[J]. 王轶南,刘学伟,刘艳萍,常亚青. 中国农业科技导报. 2011(02)
[4]软体动物和甲壳动物酚氧化酶的研究进展[J]. 吴曙,王淑红,王艺磊,张子平. 动物学杂志. 2009(05)
[5]我国海胆养殖现状及存在问题[J]. 周玮,孙俭,王俊杰,杜俊义. 水产科学. 2008(03)
[6]虾夷马粪海胆“红斑病”病原弧菌特性及致病性[J]. 王斌,李岩,李霞,陈慧黠,刘明清,孔永涛. 水产学报. 2006(03)
[7]短沟对虾和斑节对虾酚氧化酶原基因的克隆和序列分析[J]. 叶星,郑清梅,白俊杰,劳海华,简清,罗建仁. 海洋与湖沼. 2003(05)
[8]中国对虾酚氧化酶的部分生物化学特性的初步研究[J]. 汪小锋,樊廷俊. 海洋科学. 2003(04)
[9]中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)和凡纳滨对虾(Litopenaeus.vanna mei)血清酚氧化物酶活性的研究[J]. 孙兆峰,王雷. 高技术通讯. 2001(12)
[10]甲壳动物中的酚氧化酶原激活系统研究评价[J]. 孟凡伦,张玉臻,孔健,马桂荣. 海洋与湖沼. 1999(01)
本文编号：2921963
【文章来源】：大连海洋大学辽宁省
【文章页数】：33 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
光棘球海胆体腔液上清非变性电泳图
13图2 温度和pH对光棘球海胆PO活力的影响Fig. 2. The effects of temperature and pH on the proteins with PO-like activities in S. nudus. (A) The optimumtemperature of SnPOs. (B) Thermostable analysis of SnPOs. (C) The optimum pH of SnPOs. Values withdifferent letters indicate significant differences (P < 0
14图3 二价金属离子和抑制剂对光棘球海胆PO活力的影响Fig. 3. The effects of divalent metal ions and inhibitors on the proteins with PO-like activities in S. nudus. (A)The effects of metal ions on SnPO1; (B) The effects of metal ions on SnPO2; (C) The effects of metal ions onSnPO3; (D) The effects of inhibitors on the proteins with PO-like activities in S. nudus. Values from metal ion orinhibitor treatments with an asterisk indicate a significant difference (P < 0.05) compared with controls.A：二价金属离子对光棘球海胆PO1活力的影响；2：二价金属离子对光棘球海胆PO2活力的影响；3：二价金属离子对光棘球海胆PO3活力的影响；4：抑制剂对光棘球海胆PO活力的影响3.讨论线性连续梯度非变性电泳结合邻苯二酚发色法共检测出三个蛋白条带，根据分子量从高到低依次命名为SnPO1, SnPO2和SnPO3（如图1）。在这三个蛋白条带中，SnPO1相对分子质量小于21 kDa，SnPO2的电泳迁移速度平行于溴酚蓝，SnPO3的电泳迁移速度大于溴酚蓝。在海洋无脊椎动物中极小的酚氧化酶的分子量是不常见的，在线性连续梯度非变性电泳中酚氧化酶的分子量一般大于100 kDa[12，56]。在与儿茶酚反应后，SnPO1和SnPO2都呈黄色
【参考文献】：
期刊论文
[1]不同性别光棘球海胆(Strongylocentrotus nudus)性腺蛋白质组差异分析[J]. 湛垚垚,黄显雅,沈妍,刘伟,穆琳琳,郝振林,王轶南,丁君,常亚青. 海洋与湖沼. 2013(06)
[2]菲律宾蛤仔(Ruditapes philippinarum)漆酶型酚氧化酶的纯化及特性分析[J]. 蒋经伟,邢婧,战文斌. 海洋与湖沼. 2012(02)
[3]虾夷马粪海胆(Strongylocentrotus intermedius)体腔液的酚氧化酶活性分析[J]. 王轶南,刘学伟,刘艳萍,常亚青. 中国农业科技导报. 2011(02)
[4]软体动物和甲壳动物酚氧化酶的研究进展[J]. 吴曙,王淑红,王艺磊,张子平. 动物学杂志. 2009(05)
[5]我国海胆养殖现状及存在问题[J]. 周玮,孙俭,王俊杰,杜俊义. 水产科学. 2008(03)
[6]虾夷马粪海胆“红斑病”病原弧菌特性及致病性[J]. 王斌,李岩,李霞,陈慧黠,刘明清,孔永涛. 水产学报. 2006(03)
[7]短沟对虾和斑节对虾酚氧化酶原基因的克隆和序列分析[J]. 叶星,郑清梅,白俊杰,劳海华,简清,罗建仁. 海洋与湖沼. 2003(05)
[8]中国对虾酚氧化酶的部分生物化学特性的初步研究[J]. 汪小锋,樊廷俊. 海洋科学. 2003(04)
[9]中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)和凡纳滨对虾(Litopenaeus.vanna mei)血清酚氧化物酶活性的研究[J]. 孙兆峰,王雷. 高技术通讯. 2001(12)
[10]甲壳动物中的酚氧化酶原激活系统研究评价[J]. 孟凡伦,张玉臻,孔健,马桂荣. 海洋与湖沼. 1999(01)
本文编号：2921963
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