19种化合物抗大口黑鲈弹状病毒活性筛选
发布时间：2020-12-22 20:45
大口黑鲈弹状病毒（Micropterus salmoides rhabdovirus,MSRV）引起的大口黑鲈弹状病毒病是危害大口黑鲈养殖的主要病害之一。该病传播速度快,致死率高,一旦发病,在一周内可导致100%的养殖鱼类死亡,造成的危害极大。目前,尚无任何针对该病的特效药,因此对其抗病毒药物研究尤为重要。本研究通过细胞模型评价19种化合物的抗病毒活性,筛选具有较高抗MSRV活性的化合物,以期为开发抗MSRV药物提供理论基础。主要获得以下结果:1.19种化合物体外抗MSRV活性筛选利用MTT法测定19种化合物对草鱼卵巢细胞（CO）的毒性,以最大安全浓度筛选具抗MSRV活性的化合物。通过Reed-Muench法测得MSRV在感染CO细胞96h后的TCID50为10-4.29/100μL。1000×TCID50病毒液感染CO细胞后,利用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）技术检测MSRV G基因表达,筛选出3种对MSRV增殖抑制率超过50%的化合物,即:鸟嘌呤核苷（A）、阿糖腺苷（E）和牛蒡子苷元（Q）。其中,鸟嘌呤核苷抗M...
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：51 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
感染MSRV的大口黑鲈（Maetal.2014）
SO 溶液共八个浓度，向 CO 细胞大约生长至 70~80%的 96 孔培养板加入上述.1mL/孔，进行化合物对细胞毒性检测。加样时，每个药物处理设置 8 个平行置正常细胞对照。在 96h 后，按照 MTT 法测细胞活性。期间观察并记录细胞。（MTT 比色法见附录 F）.4 化合物抗 MSRV 活性筛选根据化合物对细胞毒性试验的检测结果，将 19 种化合物按照浓度分为 3 组，L 组、10mg/L 组和 50mg/L 组，每组化合物浓度作用下，细胞存活率均高于 9长至对数期、浓度大约为 1.8 × 104个/孔的 CO 细胞按照 0.5 mL/孔接种于 24养板，28℃培养箱培养至细胞长成单层。吸出旧的细胞培养液，PBS 清洗 2~3 1000 TCID50由细胞维持液稀释的 MSRV，28℃孵育 2 h，回收病毒液，PBS 次，再加入细胞维持液稀释后的各浓度化合物 0.5mL/孔，设置 DMSO 对照组活率高于 90%），28℃培养箱培养 48h 后收取细胞液（操作示意图见图 2-1）。 离心 5 min。弃上清，加入 TRIzol 试剂（每 0.2 mL 所得沉淀加入 1 mL TRIz总 RNA 提取见附录 5.
图 2-2 MSRV 的 PCR 鉴定Figure 2-2 PCR identification of MSRVM：DNAMarker DL2000 1：毒株D50测定结果胞的病变情况，在 96h 之后，对照组细胞生对照孔有明显差异，且 CPE 现象基本不再发生 10-4与 10-5之间的稀释度能使 50%的细胞出SRV 感染 CO 细胞 96h 的 TCID50=10-4.29/100μLCO 细胞 96 h 内的病毒滴度曲线变化如图 2-3着病毒感染细胞时间的增长，病毒滴度呈上表明，病毒对细胞的致病作用主要发生在 72
【参考文献】：
期刊论文
[1]现代水产养殖的常见病害和防控策略分析[J]. 夏玉秀,宋丽芬,于丽. 农业开发与装备. 2019(02)
[2]大口黑鲈主要病害研究进展[J]. 夏焱春,曹铮,蔺凌云,潘晓艺,姚嘉赟,刘忆瀚,尹文林,沈锦玉. 中国动物检疫. 2018(09)
[3]派罗欣联合利巴韦林治疗慢性丙型病毒性肝炎不良反应的观察及护理[J]. 刘秀,吴兰. 中外女性健康研究. 2017(19)
[4]水产养殖用药存在的问题及中草药的应用前景浅析[J]. 季本安,朱文博,张成飞,姬祥,刘海涛. 水产养殖. 2017(08)
[5]半夏泻心汤和鸟嘌呤核苷对APPswe/PS1dE9双转基因小鼠学习记忆的影响[J]. 盛宁,何瑛琨,冯慧利,董云芳,樊惠,党惠子,任映,杨金铎,王蓬文. 北京中医药大学学报. 2017(07)
[6]利巴韦林注射液联合清开灵注射液治疗小儿病毒性肺炎的临床研究[J]. 李吉红,邓焰,兰德联,汪泽,汪永强. 中国临床药理学杂志. 2017(03)
[7]北五味子总木脂素的GC-MS分析及其生物活性[J]. 谢旭东,穆淑珍,沈晓华,王道平,杨付梅,邓璐璐. 中国实验方剂学杂志. 2016(02)
[8]大口黑鲈鱼种弹状病毒病的诊断[J]. 雷燕,戚瑞荣,崔龙波,肖洋,张文文,马家好,王雪鹏. 大连海洋大学学报. 2015(03)
[9]加州鲈鱼弹状病毒病流行特点及综合防控技术[J]. 雷燕. 当代水产. 2015(05)
[10]黄芩苷与利巴韦林联用体内外抗流感病毒作用[J]. 何子华,付阳劲,韦兰萍,何蓉蓉,栗原博,杨耀智,陈建新. 中国药理学通报. 2011(11)
博士论文
[1]厚朴酚/和厚朴酚抗草鱼呼肠孤病毒作用机制研究[D]. 陈晓慧.西北农林科技大学 2017
[2]水泡性口炎病毒核衣壳蛋白和磷酸蛋白上关键氨基酸的功能研究[D]. 陈龙云.武汉大学 2014
[3]秦岭两种五味子属植物化学成分结构及其抗病毒活性研究[D]. 宋秋艳.兰州大学 2013
[4]新型香豆素类化合物的合成及其抑菌活性研究[D]. 章维华.南京农业大学 2010
[5]鳜鱼弹状病毒的分离、鉴定及基因组测序分析[D]. 陶建军.中国科学院研究生院（水生生物研究所） 2006
硕士论文
[1]植物性多酚多糖体外抗病毒作用的初步研究[D]. 马倩.甘肃农业大学 2018
[2]鲤春病毒主要结构蛋白的原核表达及P蛋白单克隆抗体的制备[D]. 付云红.吉林农业大学 2012
本文编号：2932407
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：51 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
感染MSRV的大口黑鲈（Maetal.2014）
SO 溶液共八个浓度，向 CO 细胞大约生长至 70~80%的 96 孔培养板加入上述.1mL/孔，进行化合物对细胞毒性检测。加样时，每个药物处理设置 8 个平行置正常细胞对照。在 96h 后，按照 MTT 法测细胞活性。期间观察并记录细胞。（MTT 比色法见附录 F）.4 化合物抗 MSRV 活性筛选根据化合物对细胞毒性试验的检测结果，将 19 种化合物按照浓度分为 3 组，L 组、10mg/L 组和 50mg/L 组，每组化合物浓度作用下，细胞存活率均高于 9长至对数期、浓度大约为 1.8 × 104个/孔的 CO 细胞按照 0.5 mL/孔接种于 24养板，28℃培养箱培养至细胞长成单层。吸出旧的细胞培养液，PBS 清洗 2~3 1000 TCID50由细胞维持液稀释的 MSRV，28℃孵育 2 h，回收病毒液，PBS 次，再加入细胞维持液稀释后的各浓度化合物 0.5mL/孔，设置 DMSO 对照组活率高于 90%），28℃培养箱培养 48h 后收取细胞液（操作示意图见图 2-1）。 离心 5 min。弃上清，加入 TRIzol 试剂（每 0.2 mL 所得沉淀加入 1 mL TRIz总 RNA 提取见附录 5.
图 2-2 MSRV 的 PCR 鉴定Figure 2-2 PCR identification of MSRVM：DNAMarker DL2000 1：毒株D50测定结果胞的病变情况，在 96h 之后，对照组细胞生对照孔有明显差异，且 CPE 现象基本不再发生 10-4与 10-5之间的稀释度能使 50%的细胞出SRV 感染 CO 细胞 96h 的 TCID50=10-4.29/100μLCO 细胞 96 h 内的病毒滴度曲线变化如图 2-3着病毒感染细胞时间的增长，病毒滴度呈上表明，病毒对细胞的致病作用主要发生在 72
【参考文献】：
期刊论文
[1]现代水产养殖的常见病害和防控策略分析[J]. 夏玉秀,宋丽芬,于丽. 农业开发与装备. 2019(02)
[2]大口黑鲈主要病害研究进展[J]. 夏焱春,曹铮,蔺凌云,潘晓艺,姚嘉赟,刘忆瀚,尹文林,沈锦玉. 中国动物检疫. 2018(09)
[3]派罗欣联合利巴韦林治疗慢性丙型病毒性肝炎不良反应的观察及护理[J]. 刘秀,吴兰. 中外女性健康研究. 2017(19)
[4]水产养殖用药存在的问题及中草药的应用前景浅析[J]. 季本安,朱文博,张成飞,姬祥,刘海涛. 水产养殖. 2017(08)
[5]半夏泻心汤和鸟嘌呤核苷对APPswe/PS1dE9双转基因小鼠学习记忆的影响[J]. 盛宁,何瑛琨,冯慧利,董云芳,樊惠,党惠子,任映,杨金铎,王蓬文. 北京中医药大学学报. 2017(07)
[6]利巴韦林注射液联合清开灵注射液治疗小儿病毒性肺炎的临床研究[J]. 李吉红,邓焰,兰德联,汪泽,汪永强. 中国临床药理学杂志. 2017(03)
[7]北五味子总木脂素的GC-MS分析及其生物活性[J]. 谢旭东,穆淑珍,沈晓华,王道平,杨付梅,邓璐璐. 中国实验方剂学杂志. 2016(02)
[8]大口黑鲈鱼种弹状病毒病的诊断[J]. 雷燕,戚瑞荣,崔龙波,肖洋,张文文,马家好,王雪鹏. 大连海洋大学学报. 2015(03)
[9]加州鲈鱼弹状病毒病流行特点及综合防控技术[J]. 雷燕. 当代水产. 2015(05)
[10]黄芩苷与利巴韦林联用体内外抗流感病毒作用[J]. 何子华,付阳劲,韦兰萍,何蓉蓉,栗原博,杨耀智,陈建新. 中国药理学通报. 2011(11)
博士论文
[1]厚朴酚/和厚朴酚抗草鱼呼肠孤病毒作用机制研究[D]. 陈晓慧.西北农林科技大学 2017
[2]水泡性口炎病毒核衣壳蛋白和磷酸蛋白上关键氨基酸的功能研究[D]. 陈龙云.武汉大学 2014
[3]秦岭两种五味子属植物化学成分结构及其抗病毒活性研究[D]. 宋秋艳.兰州大学 2013
[4]新型香豆素类化合物的合成及其抑菌活性研究[D]. 章维华.南京农业大学 2010
[5]鳜鱼弹状病毒的分离、鉴定及基因组测序分析[D]. 陶建军.中国科学院研究生院（水生生物研究所） 2006
硕士论文
[1]植物性多酚多糖体外抗病毒作用的初步研究[D]. 马倩.甘肃农业大学 2018
[2]鲤春病毒主要结构蛋白的原核表达及P蛋白单克隆抗体的制备[D]. 付云红.吉林农业大学 2012
本文编号：2932407
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