红鳍东方鲀刺激隐核虫病中草药防治及其血清免疫球蛋白IgM的纯化和特性研究
发布时间：2020-12-25 08:43
近些年来,红鳍东方纯{Takifugu rubripes)作为重要的海水养殖经济鱼类,由于其肉质细嫩、味道鲜美、蛋白质含量高以及营养含量丰富等优点,而素有“鱼类之王”的美称。地理位置多分布于黄海、渤海和日本海域。是一种可以进行养殖的鲀科鱼类中的优良品种。然而随着养殖规模的不断扩大,各种疾病所造成的伤害也就越来越大,从而导致大量化学的药物的滥用,其后果是药物残留、病虫害的耐药性和大片海域药物的扩散直接影响食品安全和环境公共卫生安全。因此迫切需要研制出对环境无污染、不具有耐药性的药物。同时对红鳍东方鲍免疫机制的研究,期望在疾病爆发时,也可以通过免疫机制进行防御。刺激隐核虫病（Cryptocaryon irritans Brown 1951）作为养殖红鳍东方鲍的主要寄生虫病,给水产养殖业造成巨大的经济损失,关于防治刺激隐核虫病的方法主要是通过化学药物进行防治,但是给鱼体本身和环境都造成很大的副作用。本实验主要是通过对刺激隐核虫的观察和从中草药方面进行筛选,从而得到最有效杀灭刺激隐核虫的中草药。同时也了解到当红鳍东方鱿感染刺激隐核虫时,其免疫系统发挥着重要作用,因此对免疫反应中最直接起到作用的...
【文章来源】：中国海洋大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：63 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
1 前言
1.1 刺激隐核虫的流行病学及防治措施
1.1.1 刺激隐核虫病原学
1.1.2 刺激隐核虫生活史
1.1.3 刺激隐核虫的宿主及发病特征
1.1.4 刺激隐核虫的危害及防治
1.1.4.1 “白点病”的危害
1.1.4.2 刺激隐核虫的防治措施
1.2 鱼类免疫系统的研究进展
1.2.1 鱼类的免疫器官和组织
1.2.2 鱼类的非特异性免疫应答
1.2.3 鱼类的特异性免疫应答
1.2.3.1 淋巴细胞
1.2.3.2 免疫球蛋白（Ig）
1.3 本实验研究的目的及意义
2 刺激隐核虫病的防治研究
2.1 材料与方法
2.1.1 刺激隐核虫滋养体的收集、包囊和幼虫的培养以及形态学观察
2.1.2 实验用中草药
2.1.3 中草药药液制备
2.1.4 中草药杀灭滋养体、幼虫
2.1.5 温度和盐度对包囊破裂、幼虫脱包产出的影响
2.2 结果
2.2.1 症状及虫体形态
2.2.2 中草药对滋养体杀灭效果
2.2.3 中草药对幼虫杀灭效果
2.2.4 温度、盐度对包囊破裂幼虫产出的影响
2.3 讨论
3 红鳍东方鲀免疫球蛋白的纯化及特性分析
3.1 实验材料与试剂
3.1.1 实验用鱼
3.1.2 主要试剂
3.1.3 主要仪器
3.2 实验方法
3.2.1 红鳍东方鲀血清制备
3.2.2 饱和硫酸铵粗提IgM
3.2.3 层析
3.2.3.1 HiTrap IgM Purification Column亲和层析
3.2.3.2 HiTrap Protein A Sepharose Column亲和层析
3.2.3.3 HiTrap DEAE Sepharose Fast Flow Column离子交换层析
3.2.4 浓缩
3.2.5 纯度分析
3.2.6 分子量测定
3.3 实验结果
3.3.1 饱和硫酸铵粗提纯化IgM的结果
3.3.2 SDS-PAGE电泳分析的结果
3.3.3 红鳍东方鲀血清蛋白浓度
3.3.4 红鳍东方鲀与其他4种海水鱼的igM的比较
3.4 讨论
4 红鳍东方纯免疫球蛋白IgM多克隆抗体的制备及其与其他4种海水鱼类的免疫交叉反应
4.1 实验材料与试剂
4.1.1 实验动物
4.1.2 主要试剂
4.2 实验方法
4.2.1 鼠抗血清IgM的制备
4.2.2 鼠抗红鳍东方鲀血清IgM效价的测定
4.2.3 鼠抗血清IgM的Western Blot检测
4.2.4 鼠抗血清IgM交叉反应检测
4.3 实验结果
4.3.1 鼠抗红鳍东方鲀IgM血清效价
4.3.2 鼠抗IgM血清的Western Blot检测
4.3.3 鼠抗IgM血清交叉反应检测
4.4 讨论
总结
参考文献
致谢
个人简历
硕士期间发表文章
【参考文献】：
期刊论文
[1]中草药防治寄生性鱼病的研究进展[J]. 胡梁及,朱盛山,张雄飞,钟娜娜,吴思平,彭亮,黄娟萍,蔡延渠. 中国兽药杂志. 2014(09)
[2]草鱼IgM的纯化、标记及检测方法的建立[J]. 田园园,叶星,张莉莉. 生物技术通报. 2013(04)
[3]龙胆石斑刺激隐核虫病防治技术研究[J]. 王大鹏,何安尤,谢达祥,李长伙,陈晓汉. 水产科技情报. 2013(01)
[4]斜带石斑鱼TLR3基因的克隆及其在刺激隐核虫感染时的表达分析[J]. 乔玮,李言伟,李安兴. 水生生物学报. 2012(03)
[5]大黄鱼刺激隐核虫病继发细菌感染致死原因的研究[J]. 刘振勇,林小金,谢友佺,吴宁江,范希军. 福建水产. 2012(01)
[6]养殖大菱鲆隐核虫病及其治疗[J]. 王印庚,刘志伟,林春媛,陈霞,王玲,李华. 水产学报. 2011(07)
[7]花鲈免疫球蛋白的分离纯化及部分特性分析[J]. 许娜娜,钱冬,赵海泉. 中国水产科学. 2011(01)
[8]刺激隐核虫生活史的观察[J]. 刘振勇,谢友佺. 福建水产. 2010(01)
[9]20种中草药杀灭离体小瓜虫的药效研究[J]. 鉏超,张其中,罗芬. 淡水渔业. 2010(01)
[10]草鱼血清IgM蛋白的纯化及抗血清的制备[J]. 丁炜东,曹丽萍,曹哲明. 水生生物学报. 2010(01)
博士论文
[1]牙鲆免疫球蛋白单克隆抗体的研制及其在牙鲆淋巴囊肿病研究中的应用[D]. 李强.中国海洋大学 2007
硕士论文
[1]主要经济鱼类血清免疫球蛋白的共同表位研究[D]. 郑惠.福建农林大学 2012
本文编号：2937316
【文章来源】：中国海洋大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：63 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
1 前言
1.1 刺激隐核虫的流行病学及防治措施
1.1.1 刺激隐核虫病原学
1.1.2 刺激隐核虫生活史
1.1.3 刺激隐核虫的宿主及发病特征
1.1.4 刺激隐核虫的危害及防治
1.1.4.1 “白点病”的危害
1.1.4.2 刺激隐核虫的防治措施
1.2 鱼类免疫系统的研究进展
1.2.1 鱼类的免疫器官和组织
1.2.2 鱼类的非特异性免疫应答
1.2.3 鱼类的特异性免疫应答
1.2.3.1 淋巴细胞
1.2.3.2 免疫球蛋白（Ig）
1.3 本实验研究的目的及意义
2 刺激隐核虫病的防治研究
2.1 材料与方法
2.1.1 刺激隐核虫滋养体的收集、包囊和幼虫的培养以及形态学观察
2.1.2 实验用中草药
2.1.3 中草药药液制备
2.1.4 中草药杀灭滋养体、幼虫
2.1.5 温度和盐度对包囊破裂、幼虫脱包产出的影响
2.2 结果
2.2.1 症状及虫体形态
2.2.2 中草药对滋养体杀灭效果
2.2.3 中草药对幼虫杀灭效果
2.2.4 温度、盐度对包囊破裂幼虫产出的影响
2.3 讨论
3 红鳍东方鲀免疫球蛋白的纯化及特性分析
3.1 实验材料与试剂
3.1.1 实验用鱼
3.1.2 主要试剂
3.1.3 主要仪器
3.2 实验方法
3.2.1 红鳍东方鲀血清制备
3.2.2 饱和硫酸铵粗提IgM
3.2.3 层析
3.2.3.1 HiTrap IgM Purification Column亲和层析
3.2.3.2 HiTrap Protein A Sepharose Column亲和层析
3.2.3.3 HiTrap DEAE Sepharose Fast Flow Column离子交换层析
3.2.4 浓缩
3.2.5 纯度分析
3.2.6 分子量测定
3.3 实验结果
3.3.1 饱和硫酸铵粗提纯化IgM的结果
3.3.2 SDS-PAGE电泳分析的结果
3.3.3 红鳍东方鲀血清蛋白浓度
3.3.4 红鳍东方鲀与其他4种海水鱼的igM的比较
3.4 讨论
4 红鳍东方纯免疫球蛋白IgM多克隆抗体的制备及其与其他4种海水鱼类的免疫交叉反应
4.1 实验材料与试剂
4.1.1 实验动物
4.1.2 主要试剂
4.2 实验方法
4.2.1 鼠抗血清IgM的制备
4.2.2 鼠抗红鳍东方鲀血清IgM效价的测定
4.2.3 鼠抗血清IgM的Western Blot检测
4.2.4 鼠抗血清IgM交叉反应检测
4.3 实验结果
4.3.1 鼠抗红鳍东方鲀IgM血清效价
4.3.2 鼠抗IgM血清的Western Blot检测
4.3.3 鼠抗IgM血清交叉反应检测
4.4 讨论
总结
参考文献
致谢
个人简历
硕士期间发表文章
【参考文献】：
期刊论文
[1]中草药防治寄生性鱼病的研究进展[J]. 胡梁及,朱盛山,张雄飞,钟娜娜,吴思平,彭亮,黄娟萍,蔡延渠. 中国兽药杂志. 2014(09)
[2]草鱼IgM的纯化、标记及检测方法的建立[J]. 田园园,叶星,张莉莉. 生物技术通报. 2013(04)
[3]龙胆石斑刺激隐核虫病防治技术研究[J]. 王大鹏,何安尤,谢达祥,李长伙,陈晓汉. 水产科技情报. 2013(01)
[4]斜带石斑鱼TLR3基因的克隆及其在刺激隐核虫感染时的表达分析[J]. 乔玮,李言伟,李安兴. 水生生物学报. 2012(03)
[5]大黄鱼刺激隐核虫病继发细菌感染致死原因的研究[J]. 刘振勇,林小金,谢友佺,吴宁江,范希军. 福建水产. 2012(01)
[6]养殖大菱鲆隐核虫病及其治疗[J]. 王印庚,刘志伟,林春媛,陈霞,王玲,李华. 水产学报. 2011(07)
[7]花鲈免疫球蛋白的分离纯化及部分特性分析[J]. 许娜娜,钱冬,赵海泉. 中国水产科学. 2011(01)
[8]刺激隐核虫生活史的观察[J]. 刘振勇,谢友佺. 福建水产. 2010(01)
[9]20种中草药杀灭离体小瓜虫的药效研究[J]. 鉏超,张其中,罗芬. 淡水渔业. 2010(01)
[10]草鱼血清IgM蛋白的纯化及抗血清的制备[J]. 丁炜东,曹丽萍,曹哲明. 水生生物学报. 2010(01)
博士论文
[1]牙鲆免疫球蛋白单克隆抗体的研制及其在牙鲆淋巴囊肿病研究中的应用[D]. 李强.中国海洋大学 2007
硕士论文
[1]主要经济鱼类血清免疫球蛋白的共同表位研究[D]. 郑惠.福建农林大学 2012
本文编号：2937316
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