斜带石斑鱼（Epinephelus coioides）eIF2α激酶基因PKR和HRI的克隆表达和功能初步分析

发布时间：2020-12-28 07:27

　　石斑鱼是我国南部沿海及东南亚地区重要的海水养殖鱼类。石斑鱼肉质鲜美、蛋白质含量高、脂肪含量低,富含人体代谢所必须的多种氨基酸和多种维生素,是一种经济价值和营养价值都很高的食用鱼类,随着石斑鱼养殖规模的扩大及养殖环境的恶化,石斑鱼病害频发且呈逐年上升趋势,已成为石斑鱼养殖业可持续发展最大的障碍。因此,研究石斑鱼自身的免疫相关基因及其作用机制,从而提高石斑鱼的免疫力和抗病能力,对于石斑鱼养殖产业十分重要。鱼类eIF2 α激酶PKR和HRI与鱼类的免疫系统密切相关,其中,PKR能激活细胞的抗病毒能力,调节生物体的免疫机制,本文对斜带石斑鱼（Epinepheluscoioides）的PKR和HHI基因进行了克隆表达,并对其功能做了初步研究。本研究利用RACE技术,从石斑鱼的脾组织中克隆获得了PK 与HRI基因全长cDNA。其中石斑鱼PKR全长为2151bp,其中ORF区为1863bp,编码621个氨基酸,蛋白的分子量大小为70157.15 D,PI为5.72。石斑鱼的HRI基因全长为2467bp,其中ORF区为1995bp,编码664个氨基酸,其蛋白分子量大小为74207.58 D,PI为6.... 

【文章来源】：海南大学海南省 211工程院校

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

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图３．４?ＳＭＡＲＴ软件分析ｆｆｉＷ的结构域??Ｆｉｇ．?３．４?Ｔｈｅ?ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ?ｄｏｍａｉｎ?ｏｆ?ＨＲＩ?ａｎａｌｙｚｅｄ?ｂｙ?ＳＭＡＲＴ??３５??

中取材正常生长石斑鱼的肝脏、脾脏、肾脏、脑、肠道、心脏、皮肤、肌肉、胃、鳃??和头肾等１１种组织，抽提组织的ＲＮＡ并逆转录成ｃＤＮＡ用ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ?ＰＣＲ的方法在??ＲｏｃｈｅＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ４８０荧光定量ＰＣＲ仪上进行分析，结果如图３．７和３．８所示，经研??究发现石斑鱼的各组织中均有份？／和？的表达，其中石斑鱼的肠道和胃中Ｗ基??因的表达量最高，而在脾脏和肠道，胃中／／似表达量最高，这表明／＾以和？在石??斑鱼体内是普遍表达广泛分布的两种蛋白。??＾?ｆｏｎｌ＇ｎｌ?—――＿?．?－Ｔ．．??Ｃ?｝?Ｉ，?．??ｉｌｌ］；?—．．．．．．．．．．．．．．．．．：．．＿＾＝術??〇?２．００Ｅ－０４?Ｎ?ＦＴ??。０?００Ｅ＋０（ｊ?＿?ｉ?ｉ?ｉｄ?ｉ?ｎ?ｉ?ｆｊ?ｉ?ｌｊ?１?Ｌ?ｉ?１１」．．．ｌ．?ｍ?ｉ?ｉ．．．?ＪＩ?ｉ?ｆ?１１?；??ｉ??／??图３．７石斑鱼各组织中ＰＯ的表达情况??用ＲｅａＵｉｍｅＰＣＲ的方法检测各组织中的Ｐ／Ｗ？ｎｉＲＮＡ以１８ＳｒＲＮＡ为内参，分析各组织中的??／／？／的相对表达量。每个样品重复３次，得到其标准偏差。??Ｆｉｇ?３．７?Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ?ｏｆ?ＰＫＲ?ｉｎ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｔｉｓｓｕｅｓ??Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ?ＰＣＲ?ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ＰＫＲ?ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｓ?ｉｎ?ｆｌｏｕｎｄｅｒ?ｔｉｓｓｕｅｓ．?Ｔｈｅ?ｓａｍｐｌｅｓ?ｗｅｒｅ?ｎｏｒｍａｌｉｚｅｄ?ｏｎ??ｔｈｅ?ｂａｓｉｓ?ｏｆ?１８Ｓ?ｒＲＮＡ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．Ｔｉｓ


本文编号：2943370