草鱼TBK1基因的克隆及其参与IFN-Ⅰ信号通路调节的功能研究

发布时间：2021-01-02 01:23

　　草鱼（Ctenopharyngodon idella）是我国重要的淡水经济鱼类之一。然而,草鱼极易受到草鱼呼肠孤病毒（grass carp reovirus,GCRV）的感染。干扰素（interferon,IFN）是一种重要的细胞功能调节因子,具有抗病毒、抗肿瘤、免疫调节等功能。宿主细胞IFN的诱导产生及其后续信号传导机制既是机体抗病毒的第一道防线更是免疫学研究的核心内容之一。TANK结合激酶1（TANK-binding kinase 1,TBK1）是IKK相关激酶家族的一员,在机体抗病毒、抗菌免疫中发挥重要作用。TBK1可磷酸化下游的干扰素调节因子3/7（interferon regulatory factor 3/7,IRF3/7）诱导干扰素的表达。相对于哺乳类而言,TBK1信号通路在硬骨鱼中研究较少。本试验通过本地EST数据库搜索和RACE技术克隆得到草鱼TBK1（CiTBK1）序列;构建启动子载体转染细胞分析启动子活性;用定量RT-PCR法检测了CiTBK1的组织差异表达模式、病毒或细菌PAMPs刺激后的时序表达模式;构建过表达载体转染细胞研究了CiTBK1介导的免疫反应。取得... 

【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：62 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
    1.1 草鱼与草鱼出血病的概述
    1.2 先天性免疫的模式识别受体
        1.2.1 TLR家族
        1.2.2 RLR家族
    1.3 TBK1研究概述
        1.3.1 TBK1的发现及结构特征
        1.3.2 TBK1的功能
        1.3.3 TBK1信号转导调控机制
        1.3.4 鱼类TBK1基因的研究进展
    1.4 研究目的和意义
第二章 草鱼TBK1基因的克隆及其参与IFN-I信号通路调节的功能研究
    2.1 前言
    2.2 材料与方法
        2.2.1 实验材料
        2.2.2 CiTBK1基因的cDNA序列获得
        2.2.3 CiTBK1基因组序列扩增
        2.2.4 CiTBK1基因序列的生物信息学分析
        2.2.5 CiTBK1启动子活性验证
        2.2.6 CiTBK1基因体内和体外的表达模式
        2.2.7 CiTBK1过表达载体的构建和转染
        2.2.8 GCRV、poly I:C、LPS和PGN刺激后CiTBK1、CiIRF3、CiIRF7、CiIFN-I、CiMx1定量检测
        2.2.9 CiTBK1基因的抗GCRV活性分析
    2.3 结果与分析
        2.3.1 CiTBK1基因组及序列分析
        2.3.2 启动子预测和验证
        2.3.3 CiTBK1基因的组织差异表达
        2.3.4 CiTBK1在GCRV感染的脾脏和头肾组织中的时序表达
        2.3.5 CiTBK1在GCRV、poly I:C、LPS和PGN刺激的CIK细胞中的时序表达
        2.3.6 GCRV、poly I:C、LPS和PGN刺激后CiTBK1、CiIRF3、CiIRF7、CiIFN-I和CiMx1定量检测
        2.3.7 CiTBK1基因的抗GCRV活性
    2.4 讨论
        2.4.1 CiTBK1基因的结构特征
        2.4.2 CiTBK1启动子活性验证
        2.4.3 CiTBK1体内外表达
        2.4.4 CiTBK1参与IFN-I信号通路调节
结论
参考文献
附录
缩略词
致谢
作者简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]草鱼呼肠孤病毒分子生物学研究进展[J]. 李永刚,曾伟伟,王庆,殷亮,王英英,石存斌,吴淑勤.  动物医学进展. 2013(04)
[2]草鱼呼肠孤病毒的致病机制及抗病毒新对策[J]. 郭帅,李家乐,吕利群.  渔业现代化. 2010(01)
[3]草鱼呼肠孤病毒及其免疫防治研究进展[J]. 肖波.  鲁东大学学报(自然科学版). 2010(01)



本文编号：2952371