企鹅珍珠贝Creb基因克隆分析及黑色素合成抑制剂和增强剂对幼贝生长性状影响的研究
发布时间：2021-01-02 21:27
企鹅珍珠贝是培育优质海水珍珠的大型育珠母贝,外壳一致的黑色,其黑色素的表达水平可影响珍珠质的色泽,进而影响珍珠质量。本研究首次半定量分析了黑色素合成相关基因Tyr,Creb,Cdk2,Pax3,Sox10,Bcl-2在企鹅珍珠贝各组织中的表达,克隆了企鹅珍珠贝Creb基因c DNA序列全长,初步研究了黑色素合成的增强剂和抑制剂对企鹅珍珠贝生长性状的影响,结果如下:1、采用半定量分析技术初步研究了黑色素合成通路中的调控基因Tyr,Creb,Cdk2,Pax3,Sox10,Bcl-2在企鹅珍珠贝外套膜、鳃、闭壳肌、消化盲囊、足、精巢、卵巢7个组织中的表达。半定量结果显示:Tyr基因在外套膜和精巢中表达量最高,鳃、闭壳肌卵巢中也有表达,初步判定Tyr基因与珍珠层成色有关。Bcl-2在外套膜、闭壳肌、和精巢中高表达,消化盲囊和卵巢中没有表达。Creb在各个组织中均有表达,但有差异,在消化盲囊、足、精巢和卵巢中表达量较高。Cdk2在消化盲囊和精巢中表达量较高,其他5个组织中表达较低。Pax3只在足组织中表达,Sox10在鳃和消化盲囊中表达量较高,精巢和卵巢中有少量表达。2、采用RACE-PCR技...
【文章来源】：广东海洋大学广东省
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
1 文献综述
1.1 企鹅珍珠贝的研究进展
1.1.1 人工育苗的研究
1.1.2 成贝的养殖研究
1.1.3 育珠技术
1.1.4 分子生物学研究
1.1.5 壳色及珍珠层研究
1.2 动物黑色素的产生机制和相关基因的研究
1.2.1 动物黑色素的产生机制
1.2.2 动物黑色素生成的相关基因的研究
1.3 黑色素生成的抑制剂和增强剂
1.3.1 黑色素生成的抑制剂和增强剂的研究进展
1.4 本研究的目的和意义
2 企鹅珍珠贝黑色素相关基因片段的半定量分析
2.1 材料与方法
2.1.1 主要仪器、试剂及材料
2.1.2 试验方法
2.2 实验结果与分析
2.2.1 各组织RNA提取
2.2.2 各基因片段的扩增
2.2.3 各基因片段的半定量表达分析
2.3 讨论
2.3.1 企鹅珍珠贝与黑色素生物合成
2.3.2 黑色素合成相关基因在企鹅珍珠贝各组织中的表达
3 企鹅珍珠贝Creb基因的克隆及特征分析
3.1 主要仪器、试剂及试验材料
3.2 实验方法
3.2.1 各组织总RNA的提取
3.2.2 SMART cDNA的合成
3.2.3 Creb 3’末端序列和 5’末端序列的克隆
3.2.4 RACE片段的分离、纯化
3.2.5 连接、转化、克隆
3.2.6 Creb基因的生物信息学分析
3.3 结果与分析
3.3.1 组织RNA的提取
3.3.2 SMART cDNA文库的建立和检测
3.3.3 企鹅珍珠贝Creb基因全长的克隆
3.3.4 企鹅珍珠贝Creb基因的序列分析和蛋白结构预测
3.4 讨论
4 黑色素合成的抑制剂熊果苷和增强剂丙戊酸（VPA）对企鹅珍珠贝幼贝生长性状的影响
4.1 主要仪器、试剂及材料
4.1.1 主要仪器设备
4.1.2 试剂
4.1.3 实验材料
4.2 试验方法设计
4.2.1 处理剂处理样品幼贝
4.2.2 饵料的培养
4.2.3 壳长、壳高、壳宽的测量
4.2.4 壳长壳高壳宽数据统计分析
4.3 实验结果
4.3.1 幼贝壳长壳宽变化
4.3.3 壳色变化的幼贝
4.4 讨论
4.4.1 熊果苷和丙戊酸对黑色素合成的影响
5 结论
参考文献
致谢
作者简介
导师简介
【参考文献】：
期刊论文
[1]黄颡鱼黑色素细胞原代培养及迁移相关基因克隆分析[J]. 程炜轩,许国焕,熊达,张丽,吴清洋,郭莹姿,谭文俊. 生态毒理学报. 2014(06)
[2]沙皮犬MC1R基因的克隆与序列分析[J]. 刘满清,刘清神,方梅霞,谢亮,聂庆华. 广东农业科学. 2014(23)
[3]MC1R基因在中国草金鱼中的遗传变异及其进化分析[J]. 杨竹青,王自蕊,熊六凤,阮记明,隗黎丽. 江西农业大学学报. 2014(05)
[4]企鹅珍珠贝游离珍珠颜色与珍珠规格的相关性[J]. 李自强,石耀华,江勇波,王爱民,顾志峰. 渔业科学进展. 2014(01)
[5]瓯江彩鲤体色相关基因Sox10的分离与表达分析[J]. 李康乐,胡建尊,颜标,王成辉. 中国水产科学. 2013(06)
[6]瓯江彩鲤体色调控相关因子MC1R的克隆与表达分析[J]. 胡建尊,李康乐,项松平,王剑,朱丽艳,王成辉. 上海海洋大学学报. 2013(04)
[7]天麻素对B16黑素瘤细胞黑色素形成的影响[J]. 陈彤,李超,朱涛,吴迪,许维岸,韩宏岩. 安徽农业科学. 2013(12)
[8]黑色素生物合成与酪氨酸酶抑制剂的研究进展[J]. 李溯,丁劲松. 中南药学. 2013(04)
[9]藏羊刺鼠信号蛋白基因（Agouti）的多态性及不同颜色被毛皮肤组织中Agouti与小眼畸形相关转录因子基因（MITF）表达的定量分析[J]. 韩吉龙,岳耀敬,裴杰,郭婷婷,刘建斌,郭健,孙晓萍,冯瑞林,杨博辉. 农业生物技术学报. 2013(03)
[10]哈萨克绵羊MC1R和ASIP基因多态性及表达量与被毛颜色表型相关性的研究[J]. 李洪涛,曾献存,张文祥,赵海璇,惠文巧,刘钢,罗燕,班谦,赵宗胜,贾斌. 畜牧兽医学报. 2013(03)
博士论文
[1]Wnt1-cre条件性敲除Sox10基因对小鼠内耳螺旋神经节发育的影响及相关机制[D]. 毛彦妍.山东大学 2014
[2]MITF、PAX3和SOX10基因突变致Waardenburg综合征发病的分子机制研究[D]. 张华.中南大学 2012
硕士论文
[1]α-MSH和cAMP对泰和乌骨鸡黑色素细胞增殖及黑色素合成的影响研究[D]. 熊渺.江西农业大学 2014
[2]长牡蛎酪氨酸酶基因家族的克隆、表达和系统发生分析[D]. 于雪.中国海洋大学 2014
[3]三种珍珠贝贝壳珍珠层颜色特征分析及其颜色与生长性状相关性研究[D]. 张欣.海南大学 2012
[4]兔MC1R基因克隆、遗传变异及不同时期表达水平的研究[D]. 王晓明.扬州大学 2012
[5]大珠母贝和企鹅珍珠贝组织蛋白酶D基因及α-淀粉酶基因的克隆与表达分析[D]. 潘俐玲.上海海洋大学 2011
[6]长牡蛎Calbin和Tyrosinase基因的克隆及其在幼虫生长发育中的表达分析[D]. 王晓菲.河北大学 2011
[7]几种麻醉方法对企鹅珍珠贝麻醉效果的研究[D]. 万正平.广东海洋大学 2010
[8]SOX10基因新突变导致Waardenburg综合征Ⅱ型家系的分析[D]. 陈艳.中南大学 2009
本文编号：2953670
【文章来源】：广东海洋大学广东省
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
1 文献综述
1.1 企鹅珍珠贝的研究进展
1.1.1 人工育苗的研究
1.1.2 成贝的养殖研究
1.1.3 育珠技术
1.1.4 分子生物学研究
1.1.5 壳色及珍珠层研究
1.2 动物黑色素的产生机制和相关基因的研究
1.2.1 动物黑色素的产生机制
1.2.2 动物黑色素生成的相关基因的研究
1.3 黑色素生成的抑制剂和增强剂
1.3.1 黑色素生成的抑制剂和增强剂的研究进展
1.4 本研究的目的和意义
2 企鹅珍珠贝黑色素相关基因片段的半定量分析
2.1 材料与方法
2.1.1 主要仪器、试剂及材料
2.1.2 试验方法
2.2 实验结果与分析
2.2.1 各组织RNA提取
2.2.2 各基因片段的扩增
2.2.3 各基因片段的半定量表达分析
2.3 讨论
2.3.1 企鹅珍珠贝与黑色素生物合成
2.3.2 黑色素合成相关基因在企鹅珍珠贝各组织中的表达
3 企鹅珍珠贝Creb基因的克隆及特征分析
3.1 主要仪器、试剂及试验材料
3.2 实验方法
3.2.1 各组织总RNA的提取
3.2.2 SMART cDNA的合成
3.2.3 Creb 3’末端序列和 5’末端序列的克隆
3.2.4 RACE片段的分离、纯化
3.2.5 连接、转化、克隆
3.2.6 Creb基因的生物信息学分析
3.3 结果与分析
3.3.1 组织RNA的提取
3.3.2 SMART cDNA文库的建立和检测
3.3.3 企鹅珍珠贝Creb基因全长的克隆
3.3.4 企鹅珍珠贝Creb基因的序列分析和蛋白结构预测
3.4 讨论
4 黑色素合成的抑制剂熊果苷和增强剂丙戊酸（VPA）对企鹅珍珠贝幼贝生长性状的影响
4.1 主要仪器、试剂及材料
4.1.1 主要仪器设备
4.1.2 试剂
4.1.3 实验材料
4.2 试验方法设计
4.2.1 处理剂处理样品幼贝
4.2.2 饵料的培养
4.2.3 壳长、壳高、壳宽的测量
4.2.4 壳长壳高壳宽数据统计分析
4.3 实验结果
4.3.1 幼贝壳长壳宽变化
4.3.3 壳色变化的幼贝
4.4 讨论
4.4.1 熊果苷和丙戊酸对黑色素合成的影响
5 结论
参考文献
致谢
作者简介
导师简介
【参考文献】：
期刊论文
[1]黄颡鱼黑色素细胞原代培养及迁移相关基因克隆分析[J]. 程炜轩,许国焕,熊达,张丽,吴清洋,郭莹姿,谭文俊. 生态毒理学报. 2014(06)
[2]沙皮犬MC1R基因的克隆与序列分析[J]. 刘满清,刘清神,方梅霞,谢亮,聂庆华. 广东农业科学. 2014(23)
[3]MC1R基因在中国草金鱼中的遗传变异及其进化分析[J]. 杨竹青,王自蕊,熊六凤,阮记明,隗黎丽. 江西农业大学学报. 2014(05)
[4]企鹅珍珠贝游离珍珠颜色与珍珠规格的相关性[J]. 李自强,石耀华,江勇波,王爱民,顾志峰. 渔业科学进展. 2014(01)
[5]瓯江彩鲤体色相关基因Sox10的分离与表达分析[J]. 李康乐,胡建尊,颜标,王成辉. 中国水产科学. 2013(06)
[6]瓯江彩鲤体色调控相关因子MC1R的克隆与表达分析[J]. 胡建尊,李康乐,项松平,王剑,朱丽艳,王成辉. 上海海洋大学学报. 2013(04)
[7]天麻素对B16黑素瘤细胞黑色素形成的影响[J]. 陈彤,李超,朱涛,吴迪,许维岸,韩宏岩. 安徽农业科学. 2013(12)
[8]黑色素生物合成与酪氨酸酶抑制剂的研究进展[J]. 李溯,丁劲松. 中南药学. 2013(04)
[9]藏羊刺鼠信号蛋白基因（Agouti）的多态性及不同颜色被毛皮肤组织中Agouti与小眼畸形相关转录因子基因（MITF）表达的定量分析[J]. 韩吉龙,岳耀敬,裴杰,郭婷婷,刘建斌,郭健,孙晓萍,冯瑞林,杨博辉. 农业生物技术学报. 2013(03)
[10]哈萨克绵羊MC1R和ASIP基因多态性及表达量与被毛颜色表型相关性的研究[J]. 李洪涛,曾献存,张文祥,赵海璇,惠文巧,刘钢,罗燕,班谦,赵宗胜,贾斌. 畜牧兽医学报. 2013(03)
博士论文
[1]Wnt1-cre条件性敲除Sox10基因对小鼠内耳螺旋神经节发育的影响及相关机制[D]. 毛彦妍.山东大学 2014
[2]MITF、PAX3和SOX10基因突变致Waardenburg综合征发病的分子机制研究[D]. 张华.中南大学 2012
硕士论文
[1]α-MSH和cAMP对泰和乌骨鸡黑色素细胞增殖及黑色素合成的影响研究[D]. 熊渺.江西农业大学 2014
[2]长牡蛎酪氨酸酶基因家族的克隆、表达和系统发生分析[D]. 于雪.中国海洋大学 2014
[3]三种珍珠贝贝壳珍珠层颜色特征分析及其颜色与生长性状相关性研究[D]. 张欣.海南大学 2012
[4]兔MC1R基因克隆、遗传变异及不同时期表达水平的研究[D]. 王晓明.扬州大学 2012
[5]大珠母贝和企鹅珍珠贝组织蛋白酶D基因及α-淀粉酶基因的克隆与表达分析[D]. 潘俐玲.上海海洋大学 2011
[6]长牡蛎Calbin和Tyrosinase基因的克隆及其在幼虫生长发育中的表达分析[D]. 王晓菲.河北大学 2011
[7]几种麻醉方法对企鹅珍珠贝麻醉效果的研究[D]. 万正平.广东海洋大学 2010
[8]SOX10基因新突变导致Waardenburg综合征Ⅱ型家系的分析[D]. 陈艳.中南大学 2009
本文编号：2953670
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