长牡蛎泛素连接酶CgE3Rv1免疫调节机制的初步探究
发布时间：2021-01-28 23:21
泛素-蛋白酶体途径是重要的蛋白质翻译后的修饰过程,在细胞周期、信号转导、转录调控、DNA修复和形态发生等各种生命过程中扮演着关键角色。目前,在无脊椎动物中关于泛素的研究相对较少,特别是软体动物中仅发现了泛素化过程的存在,但具体的泛素分子及其作用机制尚不明确。在本研究中,我们从长牡蛎（Crassostrea gigas）中鉴定了一个泛素连接酶（ubiquitin-protein ligase）E3,研究了其在长牡蛎组织中的分布特点及在脂多糖（LPS）刺激下的免疫应答过程中的作用。CgE3Rv1基因的开放阅读框（open reading frame,ORF）包含1455个碱基,编码484个氨基酸的多肽,预测分子质量为54.89 kDa。CgE3Rv1的蛋白序列中含有两个跨膜区域和一个RING-variant（RINGv）功能结构域。CgE3Rv1的RINGv结构域具有典型的C4HC3 zinc-finger-like骨架,与脊椎动物和无脊椎动物中已鉴定的泛素连接酶E3极为相似;同时,通过系统进化分析发现CgE3Rv1是一类与膜相关的RING-CH2（MARCH2）型泛素连接酶E3。荧光定量...
【文章来源】：大连工业大学辽宁省
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
泛素-蛋白酶体途径各组分的模式图
图 1.2 泛素-蛋白酶体途径的过程Figure 1.2 The process of ubiquitin-proteasome pathway注：泛素激活酶 E1 将活化后的泛素分子转移到泛素结合酶 E2 上，结合了泛素分子的 E2 通过泛素连接酶 E3 将泛素分子传递给底物，被多泛素化的底物被 26S蛋白酶体降解，泛素分子得到循环利用（图片来自中国科学院遗传与发育生物学研究所，谢旗）。1.1.3 泛素-蛋白酶体途径的主要功能泛素-蛋白酶体途径的作用不仅是单纯的介导蛋白质降解，还通过泛素化修饰蛋白参与许多调控作用，是细胞生命活动的调控因子，包括 DNA 损伤修复、信号转导、转录调节、细胞周期调控、细胞凋亡、介导内吞作用、参与疾病反应等[33]。1.1.3.1 参与 DNA 损伤修复基因组频繁地受到内部的或外部的各种因素作用而引起损伤，因此 DNA 修复是保持基因组完整性所必需的[34]。1986 年发现 DNA 修复基因 RAD6 编码泛素结合酶 E2，第一次揭示了泛素-蛋白酶体途径在 DNA 损伤修复中的作用[35]。自此，泛素-蛋白酶体
第三章 实验结果第三章 实验结果3.1 长牡蛎 CgE3Rv1 的分子特征及进化分析3.1.1 长牡蛎 CgE3Rv1 的分子特征克隆获得太平洋长牡蛎泛素连接酶 CgE3Rv1 基因，其编码的开放阅读框（Openreading frame，ORF）长度为 1455 bp，编码一条由 484 个氨基酸残基组成的多肽。预测分子量大小为 54.89 kDa，包含一个 RINGv功能结构域和两个跨膜域（图 3.1）。因为跨膜域在大肠杆菌中不能容易进行表达，所以克隆表达的蛋白只含有 RINGv功能结构域。重组蛋白 CgE3Rv1 编码基因长度为 465bp，预测分子量大小为 18.5 kDa，等电点为 8.96。
【参考文献】：
期刊论文
[1]泛素、泛素链和蛋白质泛素化研究进展[J]. 兰秋艳,高媛,李衍常,洪学传,徐平. 生物工程学报. 2016(01)
[2]泛素化的功能及其意义[J]. 王翔,魏潇凡,张宏权. 中国科学:生命科学. 2015(11)
[3]泛素化及自噬参与蛋白降解及抗原提呈的研究进展[J]. 宋琳琳,汤正好,臧国庆. 国际流行病学传染病学杂志. 2014 (02)
[4]泛素化对固有免疫应答的调控研究进展[J]. 何丽,王青青. 国际免疫学杂志. 2014 (02)
[5]泛素化介导的非蛋白质降解功能[J]. 陈季武,郑丽娜,王帮正,李晓涛. 生物化学与生物物理进展. 2012(07)
[6]自噬与泛素化蛋白降解途径的分子机制及其功能[J]. 陈科,程汉华,周荣家. 遗传. 2012(01)
[7]人泛素偶联酶E2研究进展[J]. 王韶华,朱世泽. 中华生物医学工程杂志. 2010 (06)
[8]蛋白质的泛素化修饰在细胞应激反应中的作用[J]. 董雯,郭宁,宋伦. 生物技术通讯. 2010(05)
[9]去泛素化酶的研究及其进展[J]. 王素霞,刘媛,吴慧娟,张志刚. 临床与实验病理学杂志. 2008(06)
[10]细胞凋亡中p53转录依赖与非依赖性调控[J]. 孙廷哲,陈春,沈萍萍. 细胞生物学杂志. 2008(03)
博士论文
[1]泛素偶联系统的生物信息学研究[D]. 高天顺.华中科技大学 2014
[2]泛素化与类泛素（SUMO）化在甲壳动物免疫反应中的功能[D]. 陈安静.山东大学 2013
[3]九孔鲍和近江牡蛎泛素酶（UBE2D和UIP5）的分子生物学和功能研究[D]. 叶仕根.浙江大学 2012
[4]E3泛素连接酶TRIM4和TRIM21调节细胞抗病毒天然免疫信号转导的机制[D]. 燕杰.武汉大学 2012
[5]人泛素活化酶UBE1DC1、UBE1及人泛素结合酶UBE2F的功能研究[D]. 郑眉.复旦大学 2008
本文编号：3005875
【文章来源】：大连工业大学辽宁省
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
泛素-蛋白酶体途径各组分的模式图
图 1.2 泛素-蛋白酶体途径的过程Figure 1.2 The process of ubiquitin-proteasome pathway注：泛素激活酶 E1 将活化后的泛素分子转移到泛素结合酶 E2 上，结合了泛素分子的 E2 通过泛素连接酶 E3 将泛素分子传递给底物，被多泛素化的底物被 26S蛋白酶体降解，泛素分子得到循环利用（图片来自中国科学院遗传与发育生物学研究所，谢旗）。1.1.3 泛素-蛋白酶体途径的主要功能泛素-蛋白酶体途径的作用不仅是单纯的介导蛋白质降解，还通过泛素化修饰蛋白参与许多调控作用，是细胞生命活动的调控因子，包括 DNA 损伤修复、信号转导、转录调节、细胞周期调控、细胞凋亡、介导内吞作用、参与疾病反应等[33]。1.1.3.1 参与 DNA 损伤修复基因组频繁地受到内部的或外部的各种因素作用而引起损伤，因此 DNA 修复是保持基因组完整性所必需的[34]。1986 年发现 DNA 修复基因 RAD6 编码泛素结合酶 E2，第一次揭示了泛素-蛋白酶体途径在 DNA 损伤修复中的作用[35]。自此，泛素-蛋白酶体
第三章 实验结果第三章 实验结果3.1 长牡蛎 CgE3Rv1 的分子特征及进化分析3.1.1 长牡蛎 CgE3Rv1 的分子特征克隆获得太平洋长牡蛎泛素连接酶 CgE3Rv1 基因，其编码的开放阅读框（Openreading frame，ORF）长度为 1455 bp，编码一条由 484 个氨基酸残基组成的多肽。预测分子量大小为 54.89 kDa，包含一个 RINGv功能结构域和两个跨膜域（图 3.1）。因为跨膜域在大肠杆菌中不能容易进行表达，所以克隆表达的蛋白只含有 RINGv功能结构域。重组蛋白 CgE3Rv1 编码基因长度为 465bp，预测分子量大小为 18.5 kDa，等电点为 8.96。
【参考文献】：
期刊论文
[1]泛素、泛素链和蛋白质泛素化研究进展[J]. 兰秋艳,高媛,李衍常,洪学传,徐平. 生物工程学报. 2016(01)
[2]泛素化的功能及其意义[J]. 王翔,魏潇凡,张宏权. 中国科学:生命科学. 2015(11)
[3]泛素化及自噬参与蛋白降解及抗原提呈的研究进展[J]. 宋琳琳,汤正好,臧国庆. 国际流行病学传染病学杂志. 2014 (02)
[4]泛素化对固有免疫应答的调控研究进展[J]. 何丽,王青青. 国际免疫学杂志. 2014 (02)
[5]泛素化介导的非蛋白质降解功能[J]. 陈季武,郑丽娜,王帮正,李晓涛. 生物化学与生物物理进展. 2012(07)
[6]自噬与泛素化蛋白降解途径的分子机制及其功能[J]. 陈科,程汉华,周荣家. 遗传. 2012(01)
[7]人泛素偶联酶E2研究进展[J]. 王韶华,朱世泽. 中华生物医学工程杂志. 2010 (06)
[8]蛋白质的泛素化修饰在细胞应激反应中的作用[J]. 董雯,郭宁,宋伦. 生物技术通讯. 2010(05)
[9]去泛素化酶的研究及其进展[J]. 王素霞,刘媛,吴慧娟,张志刚. 临床与实验病理学杂志. 2008(06)
[10]细胞凋亡中p53转录依赖与非依赖性调控[J]. 孙廷哲,陈春,沈萍萍. 细胞生物学杂志. 2008(03)
博士论文
[1]泛素偶联系统的生物信息学研究[D]. 高天顺.华中科技大学 2014
[2]泛素化与类泛素（SUMO）化在甲壳动物免疫反应中的功能[D]. 陈安静.山东大学 2013
[3]九孔鲍和近江牡蛎泛素酶（UBE2D和UIP5）的分子生物学和功能研究[D]. 叶仕根.浙江大学 2012
[4]E3泛素连接酶TRIM4和TRIM21调节细胞抗病毒天然免疫信号转导的机制[D]. 燕杰.武汉大学 2012
[5]人泛素活化酶UBE1DC1、UBE1及人泛素结合酶UBE2F的功能研究[D]. 郑眉.复旦大学 2008
本文编号：3005875
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