基于iTRAQ技术的罗非鱼脂肪肝差异蛋白质组学研究

发布时间：2021-02-04 21:20

　　目的：在罗非鱼饲养阶段中脂肪肝病频频发生,极大的阻碍了罗非鱼养殖业的发展步伐,本实验通过增加日投饲率建立罗非鱼脂肪肝病模型,应用iTRAQ联合多维液相色谱串联质谱技术（LC-MS/MS）筛选和鉴定健康罗非鱼与脂肪肝病罗非鱼之间的肝脏差异表达蛋白,深入分析肝脏脂肪病变过程中各差异蛋白对脂类代谢的影响,为检测与防治罗非鱼脂肪肝建立新思路。方法：根据前期研究,设计实验组B日投饲率为体重10%,对照组A为6%,饲养八周后通过检测肝指数、肝脂含量、相关肝生化指标和肝组织切片验证罗非鱼脂肪肝病模型的建立。每组取36尾鱼,将36份肝脏样品等量混合为一组,经蛋白酶切后用iTRAQ试剂标记；应用LC-MS/MS技术分离肝脏蛋白,并用软件ProteinPilotTM Software 5.0 （AB Sciex）进行蛋白质数据检索,得到可信的具有定量信息的蛋白,在错误发现率（false discovery rate） FDR<0.01的基础上,设定两组间表达量比值Ratio（B/A）>1.3或Ratio（B/A）<0.77为筛选差异表达蛋白上调或下调的阈值,将筛选到的差异蛋白进行GO分类... 

【文章来源】：广西大学广西壮族自治区 211工程院校

【文章页数】：79 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 前言
    1.1 我国罗非鱼产业发展概述
    1.2 鱼类脂肪肝病研究现状
    1.3 蛋白质组学技术在脂肪肝病上的应用
    1.4 研究目的与意义
第二章 实验材料与方法
    2.1 脂肪肝病罗非鱼模型的建立
        2.1.1 实验材料
        2.1.2 实验方法
        2.1.3 模型评分标准
    2.2 脂肪肝差异蛋白iTRAQ分析
        2.2.1 肝脏蛋白提取
        2.2.2 蛋白质定量
        2.2.3 蛋白酶切及iTRAQ试剂标记
        2.2.4 第一维高pH-RP液相分离
        2.2.5 第二维反相液质联用RPLC-MS
        2.2.6 数据检索
第三章 实验结果
    3.1 肝体比、肝脏脂肪含量、肝脏生理指标
    3.2 肝脏组织学观察
    3.3 iTRAQ脂肪肝差异蛋白质组学结果
        3.3.1 BCA Protein Assay Kit BSA蛋白浓度标准曲线
        3.3.2 鉴定质量评估
        3.3.3 肽段长度分布图
        3.3.4 蛋白质鉴定结果与差异蛋白的筛选
        3.3.5 差异表达蛋白的GO分析
        3.3.6 差异蛋白的KEGG Pathway分析
        3.3.7 目的蛋白的挑选
第四章 讨论
    4.1 动物脂肪肝模型的建立
        4.1.1 选择建立脂肪肝模型的方法
        4.1.2 脂肪肝模型的评分标准
    4.2 炎症反应相关差异蛋白与脂肪肝的关系
    4.3 胰岛素抵抗相关差异蛋白与脂肪肝的关系
    4.4 丛生蛋白与SPARC蛋白与脂肪肝的关系
    4.5 脂肪、胆固醇合成相关差异蛋白与脂肪肝形成的关系
    4.6 参与脂肪分解途径与NAFLD形成通路的差异蛋白与脂肪肝形成的关系
    4.7 参与脂肪转运途径的差异蛋白与脂肪肝形成的关系
第五章 结论
参考文献
致谢
攻读硕士学位期间发表的学术论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]鱼类瘦素受体研究进展[J]. 解菲菲,曹诣斌.  南方农业学报. 2015(09)
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博士论文
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[5]虎杖苷对非酒精性脂肪肝保护作用及机制研究[D]. 张霖.南方医科大学 2010
[6]非酒精性脂肪性肝病机制及标志物的蛋白质组学研究[D]. 王兰.浙江大学 2009
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硕士论文
[1]投喂频率和投喂水平对吉富罗非鱼幼鱼生长性能和生理机能的影响[D]. 覃希.广西大学 2014
[2]瘦素与脂蛋白酯酶、肝酯酶在妊娠期糖尿病脂代谢紊乱中的作用研究[D]. 王敏.第三军医大学 2014
[3]垂盆草提取物对草鱼脂肪肝模型药效作用研究[D]. 吴春艳.四川农业大学 2013
[4]急性酒精性脂肪肝斑马鱼模型的建立及异甘草酸镁保肝作用机制研究[D]. 戴文聪.南方医科大学 2013
[5]绿茶多酚对高脂饮食大鼠HMGCS2表达的影响[D]. 廖丹.华中科技大学 2013
[6]扯根菜提取物对草鱼脂肪肝的药理作用研究[D]. 苗常鸿.四川农业大学 2012



本文编号：3018956