温度和盐度对菲律宾蛤仔（Ruditapes philippinarum）热休克蛋白家族基因表达的影响

发布时间：2021-02-25 10:13

　　本实验利用RACE-PCR技术克隆了蛤仔HSP60基因全长,结果表明,蛤仔HSP60c DNA全长1777bp（含ploy A序列）,Gen Bank登录号:KT987978,包括1728bp的开放阅读框（ORF）,21bp的5’端非编码区（5’-UTR）和49bp的3’端非编码区（3’-UTR）,编码575个氨基酸,推导蛋白分子量（Mw）为61.25 k Da,等电点（p I）为5.04,N末端无信号肽结构,序列同源性比对发现该基因与已知的HSP60基因序列同源性较高（80%）。本研究首次成功克隆了菲律宾蛤仔的HSP60基因全长,为进一步深入研究蛤仔的抗逆机理及其遗传改良奠定了基础。采用实时荧光定量PCR技术,对HSP40、60、90基因在野生及3种壳色品系（海洋橙、斑马、白蛤）蛤仔的血细胞、闭壳肌、外套膜、足、鳃和消化腺中的表达情况进行了研究。结果显示:HSP40、60、90在野生和3种壳色蛤仔不同组织均有表达。以外套膜中的表达量为对照组,其中,HSP40基因在野生和3种壳色鳃组织中表达水平最高（p<0.01）,而在闭壳肌中的表达水平最低;HSP60基因在野生、海洋橙和斑马蛤... 

【文章来源】：大连海洋大学辽宁省

【文章页数】：84 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 绪论
    1.1 我国贝类养殖现状和存在问题
    1.2 热休克蛋白的分类及生物学功能
    1.3 研究进展
    1.4 研究目的及意义
第二章 菲律宾蛤仔HSP60基因的克隆及表达分析
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验动物
        2.1.2 实验试剂
        2.1.3 实验仪器
    2.2 实验方法
        2.2.1 蛤仔总RNA的提取
        2.2.2 HSP60基因c DNA序列全长获得
        2.2.3 凝胶回收、连接和转化
        2.2.4 蛤仔HSP60 c DNA序列的生物信息学分析
    2.3 实验结果
        2.3.1 RNA质量检测
        2.3.2 5’-和 3’-RACE产物检测
        2.3.3 蛤仔HSP60基因的生物信息学分析结果
    2.4 蛤仔HSP60表达分析
        2.4.1 实验材料
        2.4.2 样品处理及组织样提取
        2.4.3 RNA提取
        2.4.4 反转录
        2.4.5 引物设计
        2.4.6 荧光实时定量PCR条件的优化
        2.4.7 数据处理方法
    2.5 实验结果
        2.5.1 总RNA提取结果
        2.5.2 标准曲线的建立
        2.5.3 蛤仔HSP60基因组织特异性表达结果
        2.5.4 野生蛤仔HSP60基因低盐胁迫后的表达规律分析
        2.5.5 野生蛤仔HSP60基因高温胁迫后的表达规律分析
        2.5.6 野生蛤仔HSP60基因低温胁迫后的表达规律分析
    2.6 讨论
第三章 HSPS家族（40、60、90）基因启动子的克隆及初步分析
    3.1 材料与方法
        3.1.1 蛤仔总DNA的提取
        3.1.2 酶切基因组DNA
        3.1.3.酶切后DNA的纯化
        3.1.4 染色体步移接头制备
        3.1.5 连接染色体步移接头
        3.1.6 启动子区引物设计
        3.1.7 启动子区扩增
        3.1.8 启动子序列分析
    3.2 结果
        3.2.1DNA样品检测
        3.2.2 酶切基因组DNA检测
        3.2.3 启动子序列分析
    3.3 讨论
第四章 蛤仔不同壳色品系在低盐胁迫下HSPS家族（40、60、90）基因表达分析
    4.1 材料与方法
        4.1.1 低盐胁迫处理及取样
        4.1.2 实验试剂
        4.1.3 实验仪器
        4.1.4 实验方法
        4.1.5 荧光定量引物设计
    4.2 结果
        4.2.1 HSPs组织特异性表达
        4.2.2 低盐胁迫下HSPs在不同壳色蛤仔中的表达规律分析
        4.2.3 低盐胁迫下不同壳色蛤仔中HSPs的表达规律分析
    4.3 讨论
第五章 蛤仔不同壳色品系在温度胁迫下HSPS家族（40、60、90）基因表达分析
    5.1 材料与方法
        5.1.1 高温胁迫处理及取样
        5.1.2 低温胁迫处理及取样
        5.1.3 实验试剂
        5.1.4 实验仪器
        5.1.5 实验方法
        5.1.6 荧光定量引物设计
    5.2 结果
        5.2.1 高温胁迫下HSPs在不同壳色蛤仔中的表达规律分析
        5.2.2 高温胁迫下HSPs在不同壳色蛤仔中的表达规律分析
        5.2.3 低温胁迫下HSPs在不同壳色蛤仔中的表达规律分析
        5.2.4 低温胁迫下不同壳色蛤仔中HSPs的表达规律分析
    5.3 讨论
结论
参考文献
攻读硕士期间发表的学术论文
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]虾夷扇贝热休克蛋白60基因克隆及表达特性研究[J]. 孔繁东,史井运,鲍相渤,高祥刚,赫崇波,刘卫东.  生物技术通报. 2015(10)
[2]三角帆蚌热休克蛋白60基因克隆及其表达分析[J]. 吴圣楠,刘大伟,刘毅,胡宝庆,张建强,王艳,王婷.  水生生物学报. 2014(05)
[3]马氏珠母贝热休克蛋白HSP60基因的克隆与表达分析[J]. 王志新,梁海鹰,杜晓东,黄荣莲,邓岳文,王庆恒,焦钰.  广东海洋大学学报. 2013(06)
[4]菲律宾蛤仔3种壳色群体低盐耐受能力的比较研究[J]. 丁鉴锋,王锐,闫喜武,赵立强,杨凤,王连顺.  大连海洋大学学报. 2013(03)
[5]盐度骤降对菲律宾蛤仔抗氧化酶活力及组织结构的影响[J]. 宋晓楠,马峻峰,秦艳杰,常亮,王玉英,李霞,赵力强.  农学学报. 2013(01)
[6]不同壳色菲律宾蛤仔免疫机能的比较研究[J]. 丁鉴锋,杨霏,闫喜武,杨凤,赵立强,张国范.  大连海洋大学学报. 2012(05)
[7]真蛸热休克蛋白90基因（HSP90）的克隆及表达[J]. 孙田田,苏永全,洪婧妮,邬阳,张曼,毛勇.  水产学报. 2012(09)
[8]唐鱼热休克蛋白60基因cDNA克隆及表达[J]. 刘海超,陈辉辉,覃剑晖,马徐发.  华中农业大学学报. 2011(05)
[9]低温应激对吉富罗非鱼血清生化指标及肝脏HSP70基因表达的影响[J]. 刘波,王美垚,谢骏,徐跑,戈贤平,何义进,缪凌鸿,潘良坤.  生态学报. 2011(17)
[10]赤点石斑鱼HSP60基因克隆及弧菌应激前后的组织表达特性分析[J]. 曲朦,施晓峰,张之文,丁少雄.  海洋学报(中文版). 2011(01)

硕士论文
[1]三疣梭子蟹热休克蛋白HSP60和HSP90α的盐度适应相关性研究[D]. 覃烨.上海海洋大学 2012
[2]中日贝类产业发展与管理比较研究[D]. 王靖陶.中国海洋大学 2010



本文编号：3050819