海带配子体γ-碳酸酐酶的基因克隆与功能鉴定

发布时间：2021-02-27 18:00

　　本研究采用cDNA末端快速扩增（RACE）等技术获得海带配子体细胞一个γ-亚型碳酸酐酶（CA）基因的cDNA及DNA全长序列。其cDNA长为1 618 bp,编码由305个氨基酸组成的蛋白;DNA长为11 812 bp,具6个内含子,将开放阅读框（ORF）分割成7个外显子;其具有一个gamma-CA的结构域,并具有一个独特的左手平行β-螺旋结构域;由36个CA的氨基酸序列所构建的聚类图显示,该CA与其他物种的γ-CA聚为一支。因而,将该克隆的基因命名为Sjγ-CA。为了解其编码蛋白的功能,将Sjγ-CA的ORF亚克隆至表达载体pET28a上,导入大肠杆菌表达菌株BL21中,培养并诱导目的基因表达,亲和层析以纯化重组蛋白。SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE电泳）、免疫印迹和质谱技术鉴定结果表明,纯化所获得的重组蛋白是Sjγ-CA。利用电极法和分光光度计法分别检测重组的Sjγ-CA在CO2与示,重组Sjγ-CA的水合酶比活力为0.82 U/mg,但没有酯酶活性,从而从功能上鉴定了Sjγ-CA。该研究为后续探讨Sjγ-CA在海带配子体乃至孢子体细胞或组织中的亚细胞定位等研究奠定了基础... 

【文章来源】：水产学报. 2020,44(05)北大核心

【文章页数】：12 页

【参考文献】：
期刊论文
[1]人血小板衍生生长因子BB亚型包涵体复性与纯化[J]. 孙卫国,郑本献,熊志红,杨秉芬,刘艳华,张灵霞.  生物技术通讯. 2018(03)
[2]一种嗜热型碳酸酐酶基因的克隆表达及酶学性质[J]. 张朝晖,马晓舟.  工业微生物. 2015(04)
[3]缺刻缘绿藻碳酸酐酶（CA）基因的序列克隆及特征分析[J]. 梅守华,毕燕会,周志刚.  水产学报. 2015(05)
[4]海带配子体中孢子形成相关蛋白（SRP）基因的克隆及其原核表达[J]. 陈晶,王丽丽,石微微,周志刚.  水产学报. 2010(08)

硕士论文
[1]对虾溶菌酶重组蛋白在大肠杆菌表达及包涵体复性研究[D]. 张艳敏.大连工业大学 2014



本文编号：3054599