以模式动物斑马鱼为模型的迟钝爱德华氏菌保护性抗原的筛选

发布时间：2021-03-03 09:38

　　迟钝爱德华氏菌是一种重要的鱼类致病菌,严重危害到世界各地水产养殖业的健康发展。本课题基于反向疫苗学的基本原理,利用多种生物信息学的方法分析了迟钝爱德华氏菌的全基因组序列,预测得到275个候选抗原蛋白,并对所得候选蛋白进行了规模化、高通量的重组表达及纯化,进而以模式生物斑马鱼为实验动物,评价各候选抗原蛋白针对迟钝爱德华氏菌的免疫保护作用。研究中共完成193个基因的克隆,实现123个基因的异源表达,并成功纯化候选抗原蛋白85个；斑马鱼免疫保护效果显示,16个抗原蛋白的相对免疫保护率大于50%,为未来进一步的疫苗开发奠定了良好基础。同时,针对免疫保护效果较好、抗原递呈途径有显著差异的抗原蛋白GAPDH和FlgD分别在一级动物模型斑马鱼（实验室条件）和二级动物模型大菱鲆（临床鱼种）上进行了联合免疫效果评价,结果表明,两个蛋白混合后接种免疫具有更好的免疫保护效果；采用RT-qPCR分析其免疫应答机理,结果表明两个抗原蛋白混合免疫后同时激发宿主体液免疫和细胞免疫,这为后续多个抗原蛋白的联合免疫研究提供了新思路。 

【文章来源】：华东理工大学上海市 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：83 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１．１?１９５０?Ｗ来渔场养殖和海水养殖产量的増长情况（ＦＡＯ化ｔａｂａｓｅ化ｈＳｔａｔ）??Ｆｉｇ．?１．１?Ｗｏｒｌｄ?ｆｉｓｈ?ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ?ａｎｄ?ｓｕｐｐｌｙ?

?Ｙｅａｒ?（ｈ）??图１．２从１９８０到２０１２在化ｂＭｅｄ用斑马鱼检索的文献増加畳??Ｆｉｇ．?１．２?Ｔｈｅ?ｉｎｃｒｅａｓｅ?ａｍｏｕｎｔ?ｏｆ?ｚｅｂｒａｆｉｓｈ－ｓｅａｒｃｈｉｎｇ?ｉｎ?ＰｕｂＭｅｄ?ｆｒｏｍ?１９８０?ｔｏ?２０１２．??１．３迟纯爱德华氏菌——重要的海洋鱼类细菌性病原??１．３．１鱼类病害概况??细菌、寄生虫、病毒是鱼类的Ｈ种主要病害。其中，细菌性病害分布广、传播快、??危害严重，且种类繁多，难Ｗ防治。我国海水养殖鱼类主要细菌病包括弧菌病Ｗ、冬季溃??

迟纯爱德华氏菌ＥＩＢ２０２由本实验室自山东烟台大菱解病灶组织分离获得，己完成其??全基因组测序。该菌基因组序列全长３乃Ｍｂｐ，约含３５００个开放阅读框，其中包括由５３??个开放阅读框构成的质粒。基于全基因组序列的候选抗原蛋白分析预测流程（图２．１）。??ｙ?？迟钟爱德华氏菌全基因姐分析???＊??—??？去除磅膜次数大于２的蛋白质?????１１１１１，１１１????????????ｍｎ??Ｕ?？獅斑马鱼和大猶的非同源蛋白质??…—?Ｉ．?Ｉ?，?？＜??图２．１基于反向巧苗学的迟钟爱巧华氏菌候选抗原蛋白巧选过程??Ｆｉｇ．２．１?Ｒｅｖｅｒｓｅ?ｖａｃｃｉｎｏｌｏｇｙ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｐｒｏｃｅｓｓ．??（２）候选抗原蛋白亚细胞定位和跨膜螺旋的预测??对迟纯爱德华氏菌强毒株Ｅ旧２０２全基因组序列分析后获得３４８６个开放阅读框，利??用ＴＭＭＨＭ软件分析其编码产物的跨膜螺旋和跨膜次数，去除跨膜螺旋结构大于２的蛋??白，进一步利用ＰＳ０民Ｔ程序进行蛋白亚细胞定位分化最终获得蛋白５３０个，包括细胞??膜外蛋白质、细胞质膜蛋白和分泌蛋白等。??（３）鉴定斑马鱼和大菱评的非同源蛋白质??利用最新反向疫苗学预测集合软件（Ｎｅｗ?Ｅｎｈａｎｃｅｄ?Ｒｅｖｅｒｓｅ?Ｖａｃｃｉｎｏｌｏｇｙ??Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ［６Ｇ］）对所得候选蛋白进行筛选，同时分析上述蛋白的粘附情化利用ＢＩＭＡＳ??软件模块分析各蛋白与斑马鱼及大萎砰ＭＨＣＩ分子的结合能力，避免产生自身免疫：利??用Ｓｔａｎｄ－Ａｌｏｎｅ?ＢＬＡＳＴ搜索免疫效率高的同源蛋白

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3061046