Gata4和Gata6在尼罗罗非鱼类固醇生成和配子发生中作用研究
发布时间：2021-03-14 08:44
在脊椎动物中,性腺的生殖功能维持需要多种基因的表达,同时这些基因也受到多种转录因子调节。GATA家族转录因子就是其中之一,它们因结构上包含两个保守的锌指结构能识别靶基因启动子序列上的WGATAR基序而得名。同时该家族参与多种组织的发育、分化和基因表达过程。在GATA家族6个成员中Gata4/6在卵巢和精巢中均有表达。已有研究表明,在脊椎动物中Gata4/6在卵巢的滤泡细胞（Follicle cells）和精巢的支持细胞（Sertoli cells）、莱氏细胞（Leydig cells）中表达。并且Gata6也在人和小鼠的生殖细胞中表达。在小鼠卵/精巢中缺失Gata4/6导致性腺发育途径中的相关基因表达大量下调,生殖细胞数量减少,并且阻碍配子生成。同时,Gata4和Gata6在类固醇基因调控上功能相似。在硬骨鱼中,斑马鱼研究了心脏导管中Gata4的功能,同时本实验前期利用real-time PCR和原位杂交等手段对罗非鱼的Gata4/6的表达模式和功能研究进行了初步的探讨。在罗非鱼中,Gata4在成体卵巢的颗粒细胞和鞘膜细胞（Theca cells）以及成体精巢的支持细胞和输精管上皮细胞...
【文章来源】：西南大学重庆市 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：79 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
中英文缩略语对照表
第一章 文献综述
1 生殖系统以及类固醇生成
1.1 下丘脑-垂体-性腺（HPG）轴
1.2 卵巢和卵子发生
1.2.1 卵巢
1.2.2 卵子发生
1.3 精巢和精子发生
1.3.1 精巢
1.2.2 精子发生
1.4 配子发生过程中的类固醇激素生成
2 GATA家族
2.1 GATA家族成员的结构以及功能
2.2 Gata4/6的研究现状
2.2.1 Gata4/6在性腺的表达
2.2.2 Gata4/6在性腺的功能研究
2.2.3 Gata4/6与类固醇生成
3 科学问题的提出和本研究的目的意义
第二章 GATA6性腺表达初步研究
1 引言
2 实验材料和仪器
2.1 实验动物
2.2 实验试剂和仪器
2.3 有关试剂的配制
2.4 实验方法
2.4.1 罗非鱼性腺总RNA提取
2.4.2 cDNA的合成
2.4.3 性腺Gata6表达分析
2.4.3.1 Gata6 mRNA在性腺不同发育阶段的表达
2.4.3.2 性腺转录组Gata6表达分析
2.4.4 Gata6多克隆抗体制备检测
2.4.4.1 Gata6重组蛋白表达、检测和纯化
2.4.4.2 Gata6多克隆抗体制备
2.4.4.3 Gata6 Western blot检测
2.4.4.4 Gata6在性腺组织中的免疫组化检测
3 结果
3.1 Gata6在不同时期性腺中的表达
3.2 Gata6抗体检测以及细胞定位
4 讨论
4.1 Gata6在性腺中的表达
4.2 Gata6在雌雄性腺的细胞定位
第三章 GATA4/6功能的初步研究
1 引言
2 实验材料和仪器
2.1 实验动物
2.2 实验试剂和仪器
2.3 有关试剂的配制
2.4 实验方法
2.4.1 罗非鱼 gtzto4/6(JCRISPR/Cas9 敲除
2.4.1.1 敲除靶向序列的选择
2.4.1.2 gRNA和Cas9 mRNA的合成
2.4.1.3 显微注射
2.4.1.4 基因组DNA的提取、目的片段的扩增及酶切检测
2.4.1.5 敲除阳性鱼的筛选
2.4.1.6 组织学检测
2.4.1.7 免疫组化
2.4.1.8 real-time PCR和RT-PCR
2.4.1.9 激素测定
2.4.1.10 统计卵母细胞时相
2.4.1.11 数据统计
2.4.2 gata6突变F1代建立
3 结果
3.1 敲除序列的选择以及突变检测
3.2 阳性敲除鱼的筛选和敲除效率统计
3.3 Gata4/6缺失对雌鱼性腺基因表达和血清激素水平的影响
3.4 Gata4/6缺失对雄鱼性腺基因表达和血清激素水平的影响
3.5 Gata6突变F1代鱼检测
4 讨论
4.1 CRISPR/Cas9高效敲除Gata4/6
4.2 Gata4/6参与类固醇生成和雌雄配子生成
4.3 Gata4/6功能上的相关性和互补性
4.4 脊椎动物Gata4/6在进化上功能的一致性
结论
参考文献
致谢
在读期间所发表的文章
在读期间参加科研情况
【参考文献】：
期刊论文
[1]转录因子GATA-2在脊椎动物发育过程中的作用[J]. 张未丽,刘智皓,吴风瑞,黄宝锋,韩飞,孙运侣,王德寿. 四川动物. 2009(06)
[2]半滑舌鳎性腺分化的组织学观察[J]. 马学坤,柳学周,温海深,徐永江,张立敬. 海洋水产研究. 2006(02)
硕士论文
[1]尼罗罗非鱼Dmrt1、Amh和Cyp11b2抗体制备及其在正常发育和性逆转性腺中的表达研究[D]. 王婷茹.西南大学 2013
[2]尼罗罗非鱼性腺发育过程的转录组学研究及Fox家族生物信息学分析[D]. 袁静.西南大学 2013
[3]尼罗罗非鱼GATA因子表达及其功能的初步研究[D]. 叶凯.西南大学 2012
[4]牙鲆Paralichthys olivaceus性腺分化与发育的组织学研究[D]. 孙朝徽.东北农业大学 2008
本文编号：3081845
【文章来源】：西南大学重庆市 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：79 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
中英文缩略语对照表
第一章 文献综述
1 生殖系统以及类固醇生成
1.1 下丘脑-垂体-性腺（HPG）轴
1.2 卵巢和卵子发生
1.2.1 卵巢
1.2.2 卵子发生
1.3 精巢和精子发生
1.3.1 精巢
1.2.2 精子发生
1.4 配子发生过程中的类固醇激素生成
2 GATA家族
2.1 GATA家族成员的结构以及功能
2.2 Gata4/6的研究现状
2.2.1 Gata4/6在性腺的表达
2.2.2 Gata4/6在性腺的功能研究
2.2.3 Gata4/6与类固醇生成
3 科学问题的提出和本研究的目的意义
第二章 GATA6性腺表达初步研究
1 引言
2 实验材料和仪器
2.1 实验动物
2.2 实验试剂和仪器
2.3 有关试剂的配制
2.4 实验方法
2.4.1 罗非鱼性腺总RNA提取
2.4.2 cDNA的合成
2.4.3 性腺Gata6表达分析
2.4.3.1 Gata6 mRNA在性腺不同发育阶段的表达
2.4.3.2 性腺转录组Gata6表达分析
2.4.4 Gata6多克隆抗体制备检测
2.4.4.1 Gata6重组蛋白表达、检测和纯化
2.4.4.2 Gata6多克隆抗体制备
2.4.4.3 Gata6 Western blot检测
2.4.4.4 Gata6在性腺组织中的免疫组化检测
3 结果
3.1 Gata6在不同时期性腺中的表达
3.2 Gata6抗体检测以及细胞定位
4 讨论
4.1 Gata6在性腺中的表达
4.2 Gata6在雌雄性腺的细胞定位
第三章 GATA4/6功能的初步研究
1 引言
2 实验材料和仪器
2.1 实验动物
2.2 实验试剂和仪器
2.3 有关试剂的配制
2.4 实验方法
2.4.1 罗非鱼 gtzto4/6(JCRISPR/Cas9 敲除
2.4.1.1 敲除靶向序列的选择
2.4.1.2 gRNA和Cas9 mRNA的合成
2.4.1.3 显微注射
2.4.1.4 基因组DNA的提取、目的片段的扩增及酶切检测
2.4.1.5 敲除阳性鱼的筛选
2.4.1.6 组织学检测
2.4.1.7 免疫组化
2.4.1.8 real-time PCR和RT-PCR
2.4.1.9 激素测定
2.4.1.10 统计卵母细胞时相
2.4.1.11 数据统计
2.4.2 gata6突变F1代建立
3 结果
3.1 敲除序列的选择以及突变检测
3.2 阳性敲除鱼的筛选和敲除效率统计
3.3 Gata4/6缺失对雌鱼性腺基因表达和血清激素水平的影响
3.4 Gata4/6缺失对雄鱼性腺基因表达和血清激素水平的影响
3.5 Gata6突变F1代鱼检测
4 讨论
4.1 CRISPR/Cas9高效敲除Gata4/6
4.2 Gata4/6参与类固醇生成和雌雄配子生成
4.3 Gata4/6功能上的相关性和互补性
4.4 脊椎动物Gata4/6在进化上功能的一致性
结论
参考文献
致谢
在读期间所发表的文章
在读期间参加科研情况
【参考文献】：
期刊论文
[1]转录因子GATA-2在脊椎动物发育过程中的作用[J]. 张未丽,刘智皓,吴风瑞,黄宝锋,韩飞,孙运侣,王德寿. 四川动物. 2009(06)
[2]半滑舌鳎性腺分化的组织学观察[J]. 马学坤,柳学周,温海深,徐永江,张立敬. 海洋水产研究. 2006(02)
硕士论文
[1]尼罗罗非鱼Dmrt1、Amh和Cyp11b2抗体制备及其在正常发育和性逆转性腺中的表达研究[D]. 王婷茹.西南大学 2013
[2]尼罗罗非鱼性腺发育过程的转录组学研究及Fox家族生物信息学分析[D]. 袁静.西南大学 2013
[3]尼罗罗非鱼GATA因子表达及其功能的初步研究[D]. 叶凯.西南大学 2012
[4]牙鲆Paralichthys olivaceus性腺分化与发育的组织学研究[D]. 孙朝徽.东北农业大学 2008
本文编号：3081845
本文链接：https://www.wllwen.com/nykjlw/scyylw/3081845.html
