团头鲂肌肉发育和MRFs家族的进化研究
发布时间：2021-03-18 17:23
团头鲂是我国重要的草食性经济鱼类之一,目前由于过度捕捞等导致其野生种群数量急剧降低,种质资源退化,故加强优良品种的选育非常重要。而肌纤维的特性与动物肉质性状紧密相关,并且鱼类肌纤维的发育与哺乳动物有所不同:鱼类肌纤维数目的增加会持续整个生命周期,而哺乳动物肌纤维数目在出生前已固定,因此阐释鱼类肌纤维发育的变化规律及其分子机理对于揭示鱼类经济性状的遗传规律及优良品种的选育等具有重要作用。本研究采用组织学和免疫学等方法分析了团头鲂肌纤维发育和肌卫星细胞增值分化的规律;筛选出与团头鲂肌纤维发育相关的肌源性调节因子（Myogenic regulatory factors,MRFs）;初步分析了团头鲂MRFs家族成员的起源进化及其在肌纤维发育中的作用;另外,分析了热休克蛋白（Heat shock protein 70,HSP70）和脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）对团头鲂肌肉发育的影响,以此来加深对鱼类肌肉生长发育过程的认识,本研究主要结果如下:1.基于组织切片及免疫组化等方法显示,随团头鲂肌纤维发育日龄的增加,鱼体全长、体重、肌纤维长度、红白肌纤维直径和数目以及面积（增生...
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：136 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 研究背景
1 肌肉的起源和分类
1.1 动物的肌肉发育
1.2 鱼类的肌肉发育
1.3 鱼类骨骼肌的分类
2 肌卫星细胞的起源、分布及调控
2.1 肌卫星细胞的起源
2.2 肌卫星细胞的分布
2.3 肌卫星细胞增殖和分化的调控
3 肌源性调节因子（MRFs）家族的研究进展
3.1 MRFs的结构
3.2 MRFs在肌肉发育中的功能
3.3 MRFs的表达模式
3.4 MRFs家族的进化研究
4 肌肉发育的调控
4.1 肌肉发育的正调控
4.2 肌肉发育的负调控
5 本研究的目的及意义
第二章 团头鲂肌纤维不同生长发育阶段变化规律的研究
1 前言
2 材料与方法
2.1 实验材料
2.2 主要药品及试剂
2.3 仪器设备
2.4 实验方法
3 结果与分析
3.1 团头鲂出膜后不同日龄红肌纤维的变化规律
3.2 团头鲂出膜后不同日龄白肌纤维的变化规律
3.3 团头鲂出膜后不同日龄肌纤维超微结构的变化规律
3.4 1-龄和2-龄团头鲂肌纤维及相关肌肉发育基因的变化规律
4 讨论
第三章 团头鲂肌源性调节因子MRFs的克隆及表达
1 前言
2 材料与方法
2.1 实验材料
2.2 主要药品及试剂
2.3 目的基因中间片段的获得
2.4 5/3'-RACE扩增
2.5 序列分析
3 结果与分析
3.1 团头鲂总RNA的提取
3.2 团头鲂MRFs基因家族序列的获得
3.3 氨基酸的序列和结构分析
3.4 目的基因在不同组织中的表达
3.5 目的基因在不同发育时期中的表达
4 讨论
第四章 团头鲂MRFs家族基因的进化分析
1 前言
2 材料与方法
2.1 序列检索和基因预测
2.2 聚类和进化分析
2.3 基因线性分析
2.4 MRFs结构域的进化分析
3 结果与分析
3.1 两侧对称动物MRFs同源序列的聚类分析
3.2 两侧对称动物MRFs同源序列的进化分析
3.3 有颚类脊椎动物MRFs家族基因的复制和缺失分析
3.4 串联复制形成鱼类两个MyoD复制基因
3.5 MRFs结构域的进化分析
4 讨论
第五章 不同因子对团头鲂肌肉发育调控的影响
1 前言
2 材料与方法
2.1 实验材料
2.2 主要药品和试剂
2.3 团头鲂pET28a-HSP70原核表达载体构建
2.4 目的蛋白的诱导表达及优化
2.5 重组蛋白的ATP酶活性检测
2.6 团头鲂HSP70蛋白腹腔注射
2.7 团头鲂LPS腹腔注射
2.8 肌肉相关基因表达分析
2.9 肌卫星细胞分布规律的分析
2.10 蛋白质的提取和Western blot
3 结果与分析
3.1 团头鲂pET28a-HSP70原核表达载体构建
3.2 目的蛋白的诱导表达和纯化
3.3 HSP70重组蛋白的ATP酶活性检测
3.4 HSP70重组蛋白对团头鲂肌肉中相关基因和蛋白表达量的影响
3.5 HSP70重组蛋白对团头鲂肌卫星细胞分布规律及频率的影响
3.6 LPS对团头鲂红肌中相关基因表达量的影响
3.7 LPS对团头鲂白肌中相关基因表达量的影响
3.8 LPS对团头鲂肌卫星细胞分布规律及频率的影响
4 讨论
参考文献
补充数据
附录
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]草鱼MyoG基因的克隆及其组织表达谱分析[J]. 宫佳琦,李瑞文,吕彦红,景睿松,郑玉才,周继术,林亚秋. 中国农学通报. 2012(29)
[2]黄颡鱼MyoD基因的克隆及其表达[J]. 梁宏伟,李忠,邹桂伟,刘小林. 武汉大学学报(理学版). 2012(04)
[3]鳜早期发育阶段骨骼肌纤维的增生与肥大生长[J]. 朱琼,赵金良,苌建菊,Jeerawat THAMMARATSUNTORN,钱叶洲,吴超,钱德. 动物学杂志. 2011(06)
[4]奥利亚罗非鱼、尼罗罗非鱼MyoD1和MyoD2基因特征及差异[J]. 卢中华,俞菊华,李红霞,李建林,唐永凯,阮瑞霞,杨光. 中国水产科学. 2010(05)
[5]脂多糖诱导体外培养骨骼肌卫星细胞表达肝细胞生长因子的变化[J]. 路睿睿,白祥军. 中国组织工程研究与临床康复. 2007(46)
[6]鳜消化系统器官发生的组织学[J]. 吴雪峰,赵金良,钱叶洲,吴超. 动物学研究. 2007(05)
[7]Validation of Zebrafish （Danio rerio） Reference Genes for Quantitative Real-time RT-PCR Normalization[J]. Andrew DODD,Daniel LA,Warren C. MCNABB,Donald R. LOVE. Acta Biochimica et Biophysica Sinica. 2007(05)
[8]鱼类特异的基因组复制[J]. 周莉,汪洋,桂建芳. 动物学研究. 2006(05)
[9]鸡骨骼肌卫星细胞的分离培养、鉴定及生物学特性研究[J]. 陈岩,王琨,朱大海. 遗传. 2006(03)
[10]EGF、bFGF和PHGF对大鼠骨骼肌卫星细胞增殖的影响[J]. 邵素霞,马洪骏,赵春芳,张雷,郑力芬,闫蕴力,胡蔼园. 细胞生物学杂志. 2004(04)
硕士论文
[1]鳜骨骼肌慢肌胚胎期发生与胚后生长发育[D]. 苌建菊.上海海洋大学 2012
[2]不同倍性鱼骨骼肌肌纤维的比较研究[D]. 梁向阳.湖南师范大学 2011
本文编号：3088668
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：136 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 研究背景
1 肌肉的起源和分类
1.1 动物的肌肉发育
1.2 鱼类的肌肉发育
1.3 鱼类骨骼肌的分类
2 肌卫星细胞的起源、分布及调控
2.1 肌卫星细胞的起源
2.2 肌卫星细胞的分布
2.3 肌卫星细胞增殖和分化的调控
3 肌源性调节因子（MRFs）家族的研究进展
3.1 MRFs的结构
3.2 MRFs在肌肉发育中的功能
3.3 MRFs的表达模式
3.4 MRFs家族的进化研究
4 肌肉发育的调控
4.1 肌肉发育的正调控
4.2 肌肉发育的负调控
5 本研究的目的及意义
第二章 团头鲂肌纤维不同生长发育阶段变化规律的研究
1 前言
2 材料与方法
2.1 实验材料
2.2 主要药品及试剂
2.3 仪器设备
2.4 实验方法
3 结果与分析
3.1 团头鲂出膜后不同日龄红肌纤维的变化规律
3.2 团头鲂出膜后不同日龄白肌纤维的变化规律
3.3 团头鲂出膜后不同日龄肌纤维超微结构的变化规律
3.4 1-龄和2-龄团头鲂肌纤维及相关肌肉发育基因的变化规律
4 讨论
第三章 团头鲂肌源性调节因子MRFs的克隆及表达
1 前言
2 材料与方法
2.1 实验材料
2.2 主要药品及试剂
2.3 目的基因中间片段的获得
2.4 5/3'-RACE扩增
2.5 序列分析
3 结果与分析
3.1 团头鲂总RNA的提取
3.2 团头鲂MRFs基因家族序列的获得
3.3 氨基酸的序列和结构分析
3.4 目的基因在不同组织中的表达
3.5 目的基因在不同发育时期中的表达
4 讨论
第四章 团头鲂MRFs家族基因的进化分析
1 前言
2 材料与方法
2.1 序列检索和基因预测
2.2 聚类和进化分析
2.3 基因线性分析
2.4 MRFs结构域的进化分析
3 结果与分析
3.1 两侧对称动物MRFs同源序列的聚类分析
3.2 两侧对称动物MRFs同源序列的进化分析
3.3 有颚类脊椎动物MRFs家族基因的复制和缺失分析
3.4 串联复制形成鱼类两个MyoD复制基因
3.5 MRFs结构域的进化分析
4 讨论
第五章 不同因子对团头鲂肌肉发育调控的影响
1 前言
2 材料与方法
2.1 实验材料
2.2 主要药品和试剂
2.3 团头鲂pET28a-HSP70原核表达载体构建
2.4 目的蛋白的诱导表达及优化
2.5 重组蛋白的ATP酶活性检测
2.6 团头鲂HSP70蛋白腹腔注射
2.7 团头鲂LPS腹腔注射
2.8 肌肉相关基因表达分析
2.9 肌卫星细胞分布规律的分析
2.10 蛋白质的提取和Western blot
3 结果与分析
3.1 团头鲂pET28a-HSP70原核表达载体构建
3.2 目的蛋白的诱导表达和纯化
3.3 HSP70重组蛋白的ATP酶活性检测
3.4 HSP70重组蛋白对团头鲂肌肉中相关基因和蛋白表达量的影响
3.5 HSP70重组蛋白对团头鲂肌卫星细胞分布规律及频率的影响
3.6 LPS对团头鲂红肌中相关基因表达量的影响
3.7 LPS对团头鲂白肌中相关基因表达量的影响
3.8 LPS对团头鲂肌卫星细胞分布规律及频率的影响
4 讨论
参考文献
补充数据
附录
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]草鱼MyoG基因的克隆及其组织表达谱分析[J]. 宫佳琦,李瑞文,吕彦红,景睿松,郑玉才,周继术,林亚秋. 中国农学通报. 2012(29)
[2]黄颡鱼MyoD基因的克隆及其表达[J]. 梁宏伟,李忠,邹桂伟,刘小林. 武汉大学学报(理学版). 2012(04)
[3]鳜早期发育阶段骨骼肌纤维的增生与肥大生长[J]. 朱琼,赵金良,苌建菊,Jeerawat THAMMARATSUNTORN,钱叶洲,吴超,钱德. 动物学杂志. 2011(06)
[4]奥利亚罗非鱼、尼罗罗非鱼MyoD1和MyoD2基因特征及差异[J]. 卢中华,俞菊华,李红霞,李建林,唐永凯,阮瑞霞,杨光. 中国水产科学. 2010(05)
[5]脂多糖诱导体外培养骨骼肌卫星细胞表达肝细胞生长因子的变化[J]. 路睿睿,白祥军. 中国组织工程研究与临床康复. 2007(46)
[6]鳜消化系统器官发生的组织学[J]. 吴雪峰,赵金良,钱叶洲,吴超. 动物学研究. 2007(05)
[7]Validation of Zebrafish （Danio rerio） Reference Genes for Quantitative Real-time RT-PCR Normalization[J]. Andrew DODD,Daniel LA,Warren C. MCNABB,Donald R. LOVE. Acta Biochimica et Biophysica Sinica. 2007(05)
[8]鱼类特异的基因组复制[J]. 周莉,汪洋,桂建芳. 动物学研究. 2006(05)
[9]鸡骨骼肌卫星细胞的分离培养、鉴定及生物学特性研究[J]. 陈岩,王琨,朱大海. 遗传. 2006(03)
[10]EGF、bFGF和PHGF对大鼠骨骼肌卫星细胞增殖的影响[J]. 邵素霞,马洪骏,赵春芳,张雷,郑力芬,闫蕴力,胡蔼园. 细胞生物学杂志. 2004(04)
硕士论文
[1]鳜骨骼肌慢肌胚胎期发生与胚后生长发育[D]. 苌建菊.上海海洋大学 2012
[2]不同倍性鱼骨骼肌肌纤维的比较研究[D]. 梁向阳.湖南师范大学 2011
本文编号：3088668
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