多种鱼类病毒性传染疾病中病毒的检测方法研究

发布时间：2021-03-26 16:27

　　鲤春病毒（Spring Viremia of Carp Virus,SVCV）是一种弹状病毒,主要发生于春季,它可以引起鲤科鱼类的鱼苗或成鱼大规模暴发鲤春病毒血症（SVC）。传染性胰脏坏死病毒（Infectious Pancreatic Necrosis Virus,IPNV）为双片段 RNA 病毒,引起传染性胰脏坏死病（IPN）,该病属于世界性鱼病,主要危害虹鳟、大西洋鲑、大菱鉀大西洋鳕等十余种常见养殖鱼类的鱼苗。两种病毒均属于传染性病毒,疫情一旦发生,对渔业养殖造成严重危害。本研究中首先用海水鲤科鱼类细胞系（FHM）对经过纯化的SVCV和IPNV冻存样品进行增殖培养直至出现典型病变并收毒。通过设计的引物对两种病毒进行基因扩增,得到片段大小为714bp的SVCV、224bp的IPNV。然后连接到pMD18-T载体上构建重组质粒并进行测序,测序结果经NCBI在线nucleotide blast分析,再利用DNAStar构建核酸进化树,序列与SVCV糖蛋白核酸序列相似性高达99%,IPNV核苷酸同源率为79.9%-98.2%。将适量SVCV、IPNV细胞培养液喂养并注射进行人工感染。对出... 

【文章来源】：大连工业大学辽宁省

【文章页数】：82 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１－１患ＳＶＣＶ鱼病症??Ｆｉｇ．?１－１?Ｃｌｉｎｉｃａｌ?ｓｉｇｎｓ?ｏｆ?ＳＶＣＶ?ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ｃａｒｐ??

第一章文献综述紧接着较小的鱼苗中就会出现急性或者慢性发病症状，病集队游动。发病后期，有时病鱼表现出漫无目的急游、翻边缘或者进出水口附近，反复如此运动直至死亡。病鱼胸、基部有出血点。将被感染ＩＰＮＶ的死鱼进行解剖，鱼的肝和腺有出血以及少量坏死病灶，消化道内没有存留食物，有

⑵提取ＲＮＡ：??①分别取一支２０（ＶＬ病毒扩增液，两支病鱼样品，和一支作为阴性对照的灭菌水。??②按照２．２．２．１提取ＲＮＡ。??（３）ＰＣＲ?检测：??应用ＲＴ－ＰＣＲ检测ＳＶＣＶ、ＩＰＮＶ，反应体系以及条件见２．２．２．２。反应结束后，ＲＴ－ＰＣＲ??产物经１．５％琼脂糖凝胶电泳鉴定。观察是否出现的目的片段。??３结果与讨论??．?１病毒增殖结果??在本次试验中选用了ＥＰＣ，?ＦＨＭ，?ＣＨＳＥ这三种不同的接毒细胞进行培养和接毒来??在不同的细胞中ＳＶＣＶ、ＩＰＮＶ感染情况。在这对三种细胞的培养过程中发现ＥＰＣ和??Ｍ的长势比较良好，刚开始，一般在传代之后的２ｄ左右细胞可以单层铺满培养瓶的??，可以再次进行传代，而ＣＨＳＥ—般在４ｄ左右。但随着传代次数的增加细胞铺满底??时间则会加长。以下是ＥＰＣ，?ＦＨＭ，?ＣＨＳＥ这三种细胞单层铺满状态的图片。??

【参考文献】：
期刊论文
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[3]传染性胰坏死病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立[J]. 张琳琳,连科迅,张英,蒋烨,姜艳萍,崔文,乔薪瑗,唐丽杰,李一经,刘敏.  淡水渔业. 2014(04)
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[8]虹鳟鱼传染性胰脏坏死病病毒的分离与鉴定[J]. 胡晓利,李伟,肇慧君,吴斌.  中国动物检疫. 2012(03)
[9]黄颡鱼体表溃疡病病原菌分离鉴定及药敏试验[J]. 黄钧,温华成,施金谷,黄艳华,梁正生,龙宜楠,秦纪璇.  南方农业学报. 2012(01)
[10]流感病毒核酸检测方法研究进展[J]. 徐敏,向华.  动物医学进展. 2011(01)

博士论文
[1]聚合酶链式反应和基因芯片技术的研究及在主要水生动物病毒检疫和监测中的应用[D]. 刘荭.华中农业大学 2004



本文编号：3101894