河豚鱼的DNA提取及PCR检测方法比较研究

发布时间：2021-04-03 21:54

　　河豚鱼,学名河纯,泛指的是与我们饮食文化及历史密切相关的一类有毒却又味美的经济鱼类,因其鱼肉质鲜美、营养丰富,一直广受国内外消费者的喜爱。我国自1990年人工养殖成功以来,河豚鱼产业已形成了一定的规模,行业的兴衰直接关系着河豚鱼产业从业人员的利益和我国水产品行业发展的稳定性。近年来,出口方面我国河豚鱼产业面对的是进口国贸易技术壁垒的挑战,内销方面又面临着国内市场繁荣发展的契机,面对此种情况建立起先进完善的河豚鱼成分检测方法迫在眉睫。目前,国内对河豚鱼的检测主要是通过间接检测河豚鱼毒素来完成的,常用的河豚鱼毒素检测方法存在着不同程度的不足,限制了此类方法的广泛应用及发展。PCR技术是通过对物种的特异性基因进行标记将目标生物与其他物种区分开来,能从分子水平上进行物种成分的鉴定,本研究将PCR技术应用到河豚鱼成分检测鉴定的中去,将会对食品中的河豚鱼成分的直接检测开启一条新的思路。本文收集了9种河豚鱼样品,采用5种常用的DNA提取方法,通过测定DNA浓度与纯度、DNA琼脂糖凝胶电泳等方法,对5种DNA提取方法进行比较。选出较优的DNA提取方法,在此基础上对影响DNA提取的3个因素进行优化最终确... 

【文章来源】：福建农林大学福建省

【文章页数】：102 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 文献综述
    1 河豚鱼概述
        1.1 河豚鱼的分类及分布范围
        1.2 河豚鱼的营养保健价值
        1.3 我国河豚鱼行业的发展形势
        1.4 河豚鱼的安全问题
    2 河豚鱼成分的检测方法
        2.1 间接检测方法
        2.2 直接检测方法
    3 研究目的及意义
第二章 DNA提取方法的筛选与优化
    1 材料与方法
        1.1 实验材料
        1.2 仪器及试剂
        1.3 DNA试验方法筛选
        1.4 DNA提取方法的优化
        1.5 DNA提取质量检测
    2 结果与分析
        2.1 DNA试验方法筛选
        2.2 DNA提取方法的优化
    3 讨论与小结
第三章 PCR检测方法的比较
    1 材料与方法
        1.1 实验材料及仪器
        1.2 引物特异性实验
        1.3 PCR扩增实验反应体系优化
        1.4 优化后引物特异性效果对比
        1.5 灵敏度测定
        1.6 检出限测定
    2 结果与分析
        2.1 普通PCR方法的确立
        2.2 SYBR-PCR方法的确立
    3 讨论与小结
第四章 目的DNA条带的序列测定与酶切试验验证
    1 材料与方法
        1.1 实验材料
        1.2 仪器与软件
        1.3 DNA碱基序列测定
        1.4 碱基序列比对
        1.5 酶切位点结果分析
        1.6 酶切鉴定实验
        1.7 酶切在实际检验中应用
    2 结果与分析
        2.1 DNA碱基序列测定结果
        2.2 碱基序列比对结果
        2.3 酶切位点分析结果
        2.4 酶切鉴定结果
        2.5 酶切在实际检验中应用结果
    3 讨论与小结
第五章 全文总结与展望
    1 主要研究结论
        1.1 DNA提取方法的筛选与优化
        1.2 普通PCR和SYBR-PCR方法的建立和比较
        1.3 对河豚鱼目的DNA条带的序列测定与酶切试验验证
    2 未来展望
参考文献
附录1：供试样品
附录2：供试样品的DNA浓度与OD值
附录3：9种河豚鱼目的条带碱基序列
附录4：9种河豚鱼碱基序列比对
附录5：酶切位点分析
附录6：9种河豚鱼材料
术语与略语表
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]SYBR GreenⅠ实时PCR技术鉴定鸭源性成分的研究[J]. 杨丽霞,宋涛平,谢晓红,付冠艳,刘佩,彭新凯.  中国农学通报. 2013(11)
[2]河豚鱼Cyt b基因部分DNA序列分析与应用[J]. 陈文炳,林少华,邵碧英,赵晨,江树勋,闫诚,郑晶.  食品科学. 2012(20)
[3]染色质免疫共沉淀超声波破碎条件的研究[J]. 张丽丽,徐碧玉,刘菊华,贾彩红,张建斌,王甲水,金志强.  中国农学通报. 2012(30)
[4]中国河豚鱼产业现状及产业发展有关问题初探[J]. 孟雪松.  中国卫生标准管理. 2012(06)
[5]河豚的食用安全性及营养价值研究进展[J]. 王丽雅,陶宁萍,龚玺.  上海农业学报. 2012(02)
[6]河豚的养殖业发展及其消费市场解禁的必然性[J]. 关涛,何继方.  现代商业. 2011(17)
[7]河豚解禁呼声渐起[J]. 陶相银.  美食. 2011(03)
[8]PCR方法检测河豚鱼的引物筛选及反应体系优化[J]. 陈文炳,赵晨,邵碧英,江树勋,闫诚,李寿崧,林河通.  食品科学. 2010(20)
[9]河豚毒素免疫检测技术研究进展[J]. 丛蕾,王锡昌,刘源,卢瑛.  食品科学. 2009(19)
[10]水稻DNA快速提取及RAPD分析体系的优化[J]. 韩美丽,陆荣生,霍秀娟,梁志强.  江西农业学报. 2009(05)



本文编号：3117154