乌鳢早期性腺发育组织学及Foxl2和Cyp19a1b基因的克隆和表达研究
发布时间：2021-04-07 13:55
性腺分化的组织学观察对脊椎动物性腺分化机制的理解具有重要的意义。Foxl2（Forkhead box L2）是翼状螺旋/叉头框转录因子超家族成员之一,参与卵巢的发育、颗粒细胞的分化和卵巢功能的维持,Foxl2基因缺失会导致眼睑畸形和卵巢功能早衰。芳香化酶P450arom为类固醇代谢中的重要酶类,它能够催化雄激素转化为雌激素,并对脊椎动物的性别分化和发育至关重要。多数鱼类中存在两种类型芳香化酶基因,即性腺型（Cypl9ala）和脑型（Cypl9alb）。Cypl9ala对雌激素合成和卵巢分化具有重要作用,Cypl9alb与脑中雌二醇生物合成紧密相关,可能参与中枢神经系统的发育和性行为的调节。乌鳢是我国重要的淡水经济鱼类,同龄雄性乌鳢生长速度快于雌性。为了解乌鳢性别分化相关机制,为人工控制乌鳢性别奠定基础,本文通过组织学方法研究乌鳢早期性腺发育过程，同时通过克隆性别相关基因Cypl9alb和Foxl2基因,探讨Foxl2基因在性腺分化过程中基因表达的变化,并通过免疫组织化学方法研究Foxl2在成熟乌鳢性腺中的分布情况。结果如下：1.乌鳢早期性腺发育的组织学观察出膜后6 d的仔鱼,在中肾管腹...
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：78 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
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【参考文献】：
期刊论文
[1]乌鳢一个养殖群体中性别连锁AFLP标记的筛选[J]. 姜龙,王忠卫,周莉,桂建芳. 水生生物学报. 2013(06)
[2]半滑舌鳎抗缪勒氏管激素（AMH）基因的克隆及组织表达分析[J]. 刘姗姗,孙冰,梁卓,张静,陈松林. 中国水产科学. 2013(01)
[3]温度、盐度和pH对尼罗罗非鱼性别分化的影响[J]. 王海贞,王辉,强俊,徐跑,李瑞伟. 应用生态学报. 2012(10)
[4]胡子鲇脑型芳香化酶基因全长cDNA克隆及表达[J]. 孙晶,李广丽,朱春华,吴天利,邓思平. 中国水产科学. 2012(03)
[5]SSR-BSA技术对乌鳢性别差异标记的初步筛选[J]. 刘改艳,陈昆慈,郑光明,朱新平,赵建,徐鹏,孙效文. 水产学报. 2011(02)
[6]鱼类性别决定及性别特异分子标记的研究进展[J]. 高建军,高泽霞,王卫民. 水产科学. 2010(07)
[7]奥利亚罗非鱼卵巢芳香化酶基因的克隆及其表达[J]. 唐永凯,李建林,陈文华,俞菊华. 中国水产科学. 2008(05)
[8]半滑舌鳎的性腺分化和温度对性别决定的影响[J]. 邓思平,陈松林,田永胜,刘本伟,庄志猛,王清印,邓寒. 中国水产科学. 2007(05)
[9]赤点石斑鱼两种芳香化酶cDNA的克隆及其表达的组织特异性[J]. 李广丽,刘晓春,张勇,贝锦新,林浩然. 动物学报. 2004(05)
[10]鱼类性别决定及其机制的研究进展[J]. 王德寿,吴天利,张耀光. 西南师范大学学报(自然科学版). 2000(03)
博士论文
[1]半滑舌鳎（Cynoglossus semilaevis）线粒体基因组全序列和性别相关基因的克隆与表达分析[D]. 董晓丽.中国海洋大学 2010
硕士论文
[1]乌鳢性别相关的Dmrt基因的克隆及其组织表达特征[D]. 周楠.河北大学 2014
[2]牙鲆性别相关基因的克隆与表达分析[D]. 翁申达.中国科学院研究生院（海洋研究所） 2013
[3]大黄鱼原始生殖细胞发生、迁移及性腺性别分化的组织学研究[D]. 游秀容.集美大学 2012
本文编号：3123617
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：78 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２乌给总ＲＮＡ??Ｆｉｇ．?２?Ｔｏｔａｌ?ＲＮＡ?ｏｆ?Ｃ．?ａｒｇｕｓ??
２．２乌巧砂／＞／如＊／＆基因ｃＤＮＡ中间片段和３？巧的克ｇ??从乌錯胁组织总ＲＮＡ反转录的ｃＤＮＡ为模板，利用Ｃ＿ｖ／？／９ａ／６－Ｆ和Ｃ炒??进行中间片段扩增，获得１０００?ｂｐ左右条带（图３），与预期结果相符。经??测序得知该中间片段大小为１０８４?ｂｐ。根据所得乌錯口化中间片段设计基因特??异性引物进行３’ＲＡＣＥ扩増，获得８００?ｂｐ左右的条带（图３），经测序得知３’ＲＡＣＥ??片段长度为７８１?ｂｐ。将两段ｃＤＮＡ片段比对拼接，得到１４３２?ｂｐ乌體ｃＤＮＡ??部分巧列（ＧｅｎＢａｎｋ登录号ＫＦ７４６０７３）。该ｃＤＮＡ序列包括１２０ｂｐ３ｉ－ＵＴＲ和１３Ｈ??ｂｐ编码区，编矿ｉ?４％个勤茲酸。??１?Ｍ?２?Ｍ??Ｈ—…，??？—?１０００?ｂｐ??４—?７５０?ｂｐ??４—?５００?ｂｐ??令一２５０?ｂｐ??４—?１００?ｂｐ??图３乌绝〇／７／化／／６基因扩增产物??Ｆｉｇ．?３?ＰＣＲ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｐｒｏｄｕｃｔ?ｏｆ?ｐａｒｔｉａｌ?Ｃｙｐｌ９ａｌｈ?ｃＤＮＡ?ｏｆ?Ｃ?ａｒｇｎｓ??Ｍ：?２０００ｂｐＤＮＡＭａｒｋｅｒ；?１：中间片段扩増产伽２：?３１ＲＡＣＥ产物??Ｍ：?２０００?ｂｐ?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ；?１：?ｐｒｏｄｕｃｔ?ｏｆ?ｗ＾！＼ｄ＼ｙｐＩ９ａ！ｂ＼?２：?ｐｒｏｄｕｃｔ?ｏｆ?３＇ＲＡＣＥ??２．３乌Ｈ?基因巧列分祈??２．３．１乌基因同源性比对??ＢＬＡＳＴ分析表明，乌錯斯ｃＤＮＡ序列与ＧｅｎｅＢａｎｋ中其他鱼类（：＞／７八口化??ｃＤＮＡ序列的同源性为７２％？８８％，与ｃＤＮＡ序列同源巧则低于７１％。不??Ｎ种类氨基酸序列比对结果思示
Ｗ乌罐卵巢总ＲＮＡ反转录的ｃＤＮＡ为模板，利用Ｆｏｘ／２－Ｆ和仍ＪＣ化民进行仍ＪＣ／２??中间片段扩增，获得７５０?ｂｐ左右条带，与预期结果相符。经测序获得７４０?ｂｐ的中间??片段（图６）。根据得到的中间片段设计特异性引物，进行ＲＡＣＥ扩增。通过３’ＲＡＣＥ??扩増得到一条１２００?ｂｐ左右的条带（图６），５１ＲＡＣＥ得到一条９００?ｂｐ左右的条带（图??６），测序结果显示３｜１１入〔６片段长度为９５７?６口，５｜１＾〔５片段长度为７９８?６９。将三段??ｃＤＮＡ片段比对拼接，得到乌罐仍；Ｃ／２?ｃＤＮＡ全氏序列（ＧｅｎＢａｎｋ登录巧ＫＦ７４６０７２）。??乌錯?Ｆａｖ／２?基因?ｃＤＮＡ?全长?１９６６?ｂｐ，包括?２１３?ｂｐ?的?５Ｉ－ＵＴＲ，８３２?ｂｐ?的?３Ｉ－ＵＴＲ?和?ｊ??ｂｐ的编码区，编码３７６个氨基酸。?Ｉ??１?Ｍ?２?Ｍ?３?Ｍ?Ｉ??ｎ?一０００?ｂｐ?Ｉ??户１０００?ｂｐ??＾?７５０?ｂｐ??如－５００?ｂｐ??２５０?ｂｐ??１００?ｂｐ??图６乌巧仍；ｃ口基因扩增产物??Ｆｉｇ．?６?ＰＣＲ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｐｒｏｄｕｃｔ?ｏｆ?Ｆｏｘｌ２?ｃＤＮＡ?ｏｆ?Ｃ．?ａｒｇｕｓ??Ｍ：?２０００ｂｐＤＮＡＭａｒｌｃｅｒ；?１；中间片段扩增产物：２：?ＴＲＡＣＥ?产物；３：?５’ＲＡＣＥ?产物??Ｍ：?２０００?ｂｐ?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ；?Ｉ：?ｐｒｏｄｕｃｔ?ｏｆ?ｐａｒｔｉａｌ?ＣｙｐＩ９ａＩｂ＼?２：?ｐｒｏｄｕｃｔ?ｏｆ?３＇ＲＡＣＥ；?３：?ｐｒｏｄｕｃｔ?ｏｆ?５＇ＲＡＣＥ??Ｉ??２．５乌達Ｆｏｊｃ／２基因巧列分析??２．５．１乌ｇ?Ｆ＜
【参考文献】：
期刊论文
[1]乌鳢一个养殖群体中性别连锁AFLP标记的筛选[J]. 姜龙,王忠卫,周莉,桂建芳. 水生生物学报. 2013(06)
[2]半滑舌鳎抗缪勒氏管激素（AMH）基因的克隆及组织表达分析[J]. 刘姗姗,孙冰,梁卓,张静,陈松林. 中国水产科学. 2013(01)
[3]温度、盐度和pH对尼罗罗非鱼性别分化的影响[J]. 王海贞,王辉,强俊,徐跑,李瑞伟. 应用生态学报. 2012(10)
[4]胡子鲇脑型芳香化酶基因全长cDNA克隆及表达[J]. 孙晶,李广丽,朱春华,吴天利,邓思平. 中国水产科学. 2012(03)
[5]SSR-BSA技术对乌鳢性别差异标记的初步筛选[J]. 刘改艳,陈昆慈,郑光明,朱新平,赵建,徐鹏,孙效文. 水产学报. 2011(02)
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[7]奥利亚罗非鱼卵巢芳香化酶基因的克隆及其表达[J]. 唐永凯,李建林,陈文华,俞菊华. 中国水产科学. 2008(05)
[8]半滑舌鳎的性腺分化和温度对性别决定的影响[J]. 邓思平,陈松林,田永胜,刘本伟,庄志猛,王清印,邓寒. 中国水产科学. 2007(05)
[9]赤点石斑鱼两种芳香化酶cDNA的克隆及其表达的组织特异性[J]. 李广丽,刘晓春,张勇,贝锦新,林浩然. 动物学报. 2004(05)
[10]鱼类性别决定及其机制的研究进展[J]. 王德寿,吴天利,张耀光. 西南师范大学学报(自然科学版). 2000(03)
博士论文
[1]半滑舌鳎（Cynoglossus semilaevis）线粒体基因组全序列和性别相关基因的克隆与表达分析[D]. 董晓丽.中国海洋大学 2010
硕士论文
[1]乌鳢性别相关的Dmrt基因的克隆及其组织表达特征[D]. 周楠.河北大学 2014
[2]牙鲆性别相关基因的克隆与表达分析[D]. 翁申达.中国科学院研究生院（海洋研究所） 2013
[3]大黄鱼原始生殖细胞发生、迁移及性腺性别分化的组织学研究[D]. 游秀容.集美大学 2012
本文编号：3123617
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