卵形鲳鲹生长激素（GH）和催乳素（PRL）基因克隆及原核表达
发布时间：2021-04-09 16:37
生长激素和催乳素来源于同一个祖基因,是鱼类调控生长内分泌的重要因子。本文克隆得到卵形鲳鯵生长激素以及催乳素的ORFcDNA序列,构建生长激素以及催乳素原核表达载体。1.从卵形鲳鯵转录组中得到887bp的生长激素cDNA全长序列。利用RT-P CR方法从卵形鲳鯵下丘脑中克隆获得生长激素ORF cDNA序列,该ORF是由17个信号肽和162个成熟肽组成。卵形鲳鯵生长激素ORF的氨基酸相对分子量为22695.03,理论PI为6.73,为偏酸性氨基酸,其疏水性氨基酸有71个。氨基酸序列比对分析结果表明:卵形鲳鯵与鱼类的氨基酸同源性都在50%以上,其中与鯵科的黄尾鰤氨基酸同源性89.6%为最高。卵形鲳鯵生长激素的ORF氨基酸序列含有两个生长激素家族的标签序列,分别为CnSdyliSPidkheTqrssvlkLlsiscq LveSW和CFKkDMhKVEtYltVakC。卵形鲳鯵生长激素蛋白具有亲水性,其三级结构有4个α-螺旋柱,这与其他鱼类绳子生长激素蛋白结构相似。2.利用卵形鲳鯵转录组获得催乳素1586bp cDNA全长序列,通过RT-PCR方法从该鱼脑垂体中克隆得到催乳素的ORF cDN...
【文章来源】：海南大学海南省 211工程院校
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－１?ＰＲＬ信号作用路径（引自Ｗａｎｇ?Ｙｅｔ?ａ丨．，２０１２）??Ｆｉｇ．?１－１?Ｔｈｅ?ｒｏｌｅ?ｏｆ?ＰＲＬ?ｓｉｇｎａｌｉｎｇ?ｐａｔｈｗａｙ?（ｆｒｏｍ?Ｗａｎｇ?Ｙ?ｅｔ?ａｌ．，?２０１２）??
鱼．ｉＴｈｕｎｎｕｓ?ｔｈｙｎｎｕｓ）?（Ｌａｗ，?１９９６）、虹縛／７７＿ｙＡ７＿ｗ）?（Ａｇｅｌｌｏｎ，??１９８８）以及大西洋鲑（５ｂ／ｍｏ?ｒａ／ａ／Ｏ?（Ｇｒｏｓｓ，?１９９９）等鱼类的生长激素，发现??鱼类的生长激素基因有两种形式（图１－２）?（ＫａｗａｕｃｈｉＨ，?１９８６）。其最为代表??的是鲑鳟鱼类和鲤科鱼类（ＬＢ，１９８６）。鲑鳟鱼类的生长激素基因有６个外显??子和５个内含子比哺乳动物各多了一个外显子和内含子，其整个基因组长度约为??哺乳类的两倍（Ｊｏｈａｎｓｅｎ，?１９８９）；而鲤科鱼类的ＧＨ基因与哺乳类的基因组结??构相似，有５个外显子，５个内含子（Ｚｈｕ，?１９９２）。??Ｉ?－ｉＭ．?＿＿—?２＊．＊．．?ｔ??－牛－＂包?’ｎ?ｍｕ?二上＿＿ｉ＊？．—二１．．．．．?ｍｉｍｍ?．??＾?．?ｉｈ＾ｈｈ?？?ｍｓｍ?Ｈ?－－－－—???？ｊ?ｎ?１???■．一．?＇?￣??ｍｓｔＫｍ?－＊ｓ＇ｆ?＾－１１１１，，似?ｍｓｍｍｓｍｍ?＾＊５?一??大西洋鞋鱼ｎ■崎ｉｒ＿以ｍ——』?ｍ＾ｒ＾－—．一??４ｌｉ?＿＿???—?，?ｒ歧．．．－．ｖ??罗非鱼?—??細??图１－２不同脊椎动物生长激素基因结构（引自郝羽，２０１１）??Ｆｉｇ．?１－２?Ｔｈｅ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｇｅｎｅ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆ?ｖｅｒｔｅｂｒａｔｅ?ＧＨ?（ｆｒｏｍ?ＨａｏＹｕ
麻哈鱼（０／７ＣＯ／却ＧＨ的分子量为２２ｋＤａ；罗非鱼ＧＨ的分子量为??２２．２ｋＤａ等（徐斌，１９９７）。鱼类生长激素化学结构是由多个半觥氨酸构成二硫??键所组成的，其中包含大环和小环各一个。鱼类生长激素空间结构（图１－３）特??征：（］）ａ－螺旋折叠成４个反向平行螺旋柱；（２）其蛋白的螺旋Ｄ区相对于其??他位置，其氨基酸的保守性更强；（３）疏水氨基酸作为受体结合位点位于ＧＨ??蛋白质内部，对维持蛋白质四级结构中起到关键作用（Ｄｅｖｌｉｎ，１９９３）。??Ｃｉｌ?］?？?２??Ｃ?Ｉ?广?Ｊ?ｌ?／??１＞Ｉ?Ｖ￣￣??ｔ?ｊ．??图１－３生长激素空间结构（引自陈蓓，２００４）??Ｆｉｇ．?１－３?Ｔｈｅ?ｓｐａｔｉａｌ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆ?ＧＨ?（ｆｒｏｍ?Ｃｈｅｎ?Ｂｃｉ，?２００４）??１．２．２鱼类生长激素的合成、分泌以及释放??Ｙａｍａｄａ等（１９９３）在－些鱼类的腺垂体中找到Ｐｉｔ－１，并在ＧＨ的启动子区??域找到能与Ｐｉｔ－１高效的结合位点；而且在另外一些鱼类的启动子区域中也发现??ｃＡＭＰ有生物功能作用（Ｗｏｎｇ，?１９９６；?Ｂｅｒｎａｒｄｉｎｉ，?１９９９）。因而一些学者认为??Ｐｉｔ－１和ｃＡＭＰ能够控制兔类生长激素的合成。??鱼类生长激素分泌是由下丘脑的生长释放激素（ＧＨＲＨ）和生长激素释放抑??制激素（ＳＩＲＨ）共同调控的，ＧＨＲＨ负责正调控而ＳＩＲＨ负责负调控。从１９７０??年以来
【参考文献】：
期刊论文
[1]卵形鲳鲹肉碱棕榈酰基转移酶Ⅰ全长cDNA序列的克隆及生物信息学分析[J]. 方玲玲,王忠良,陈刚,汤保贵,张健东,黄建盛,周晖. 广东海洋大学学报. 2015(03)
[2]美人鱼发光杆菌杀鱼亚种感染卵形鲳鲹的病理学观察[J]. 苏友禄,冯娟,郭志勋,徐力文,王江勇. 海洋科学. 2012(02)
[3]卵形鲳鲹胚后发育阶段鳃的分化和发育[J]. 区又君,何永亮,李加儿. 中国水产科学. 2012(01)
[4]卵形鲳鲹消化系统的胚后发育[J]. 区又君,何永亮,李加儿. 台湾海峡. 2011(04)
[5]卵形鲳鲹幼鱼的赖氨酸需求量[J]. 杜强,林黑着,牛津,丁贤,黄忠,陈旭,陈义方. 动物营养学报. 2011(10)
[6]卵形鲳鲹消化酶活性的研究Ⅳ 养殖水温和酶反应温度对幼鱼酶活性的影响[J]. 区又君,罗奇,李加儿,蔡文超. 海洋渔业. 2011(01)
[7]卵形鲳鲹幼鱼蛋白质需要量的研究[J]. 刘兴旺,许丹,张海涛,梁海鸥. 南方水产科学. 2011(01)
[8]卵形鲳鲹消化酶活性的研究Ⅰ.成鱼和幼鱼消化酶活性在不同消化器官中的分布及其比较[J]. 区又君,罗奇,李加儿,范春燕. 南方水产科学. 2011(01)
[9]卵形鲳鲹消化酶活性的研究ⅢpH对幼鱼和成鱼消化酶活性的影响[J]. 区又君,罗奇,李加儿. 海洋渔业. 2010(04)
[10]卵形鲳鲹线粒体16S rRNA基因全长序列的克隆与分析[J]. 彭金霞,彭敏,陈秀荔,蒋伟明,杨春玲,李咏梅. 水生态学杂志. 2010(04)
本文编号：3127957
【文章来源】：海南大学海南省 211工程院校
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－１?ＰＲＬ信号作用路径（引自Ｗａｎｇ?Ｙｅｔ?ａ丨．，２０１２）??Ｆｉｇ．?１－１?Ｔｈｅ?ｒｏｌｅ?ｏｆ?ＰＲＬ?ｓｉｇｎａｌｉｎｇ?ｐａｔｈｗａｙ?（ｆｒｏｍ?Ｗａｎｇ?Ｙ?ｅｔ?ａｌ．，?２０１２）??
鱼．ｉＴｈｕｎｎｕｓ?ｔｈｙｎｎｕｓ）?（Ｌａｗ，?１９９６）、虹縛／７７＿ｙＡ７＿ｗ）?（Ａｇｅｌｌｏｎ，??１９８８）以及大西洋鲑（５ｂ／ｍｏ?ｒａ／ａ／Ｏ?（Ｇｒｏｓｓ，?１９９９）等鱼类的生长激素，发现??鱼类的生长激素基因有两种形式（图１－２）?（ＫａｗａｕｃｈｉＨ，?１９８６）。其最为代表??的是鲑鳟鱼类和鲤科鱼类（ＬＢ，１９８６）。鲑鳟鱼类的生长激素基因有６个外显??子和５个内含子比哺乳动物各多了一个外显子和内含子，其整个基因组长度约为??哺乳类的两倍（Ｊｏｈａｎｓｅｎ，?１９８９）；而鲤科鱼类的ＧＨ基因与哺乳类的基因组结??构相似，有５个外显子，５个内含子（Ｚｈｕ，?１９９２）。??Ｉ?－ｉＭ．?＿＿—?２＊．＊．．?ｔ??－牛－＂包?’ｎ?ｍｕ?二上＿＿ｉ＊？．—二１．．．．．?ｍｉｍｍ?．??＾?．?ｉｈ＾ｈｈ?？?ｍｓｍ?Ｈ?－－－－—???？ｊ?ｎ?１???■．一．?＇?￣??ｍｓｔＫｍ?－＊ｓ＇ｆ?＾－１１１１，，似?ｍｓｍｍｓｍｍ?＾＊５?一??大西洋鞋鱼ｎ■崎ｉｒ＿以ｍ——』?ｍ＾ｒ＾－—．一??４ｌｉ?＿＿???—?，?ｒ歧．．．－．ｖ??罗非鱼?—??細??图１－２不同脊椎动物生长激素基因结构（引自郝羽，２０１１）??Ｆｉｇ．?１－２?Ｔｈｅ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｇｅｎｅ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆ?ｖｅｒｔｅｂｒａｔｅ?ＧＨ?（ｆｒｏｍ?ＨａｏＹｕ
麻哈鱼（０／７ＣＯ／却ＧＨ的分子量为２２ｋＤａ；罗非鱼ＧＨ的分子量为??２２．２ｋＤａ等（徐斌，１９９７）。鱼类生长激素化学结构是由多个半觥氨酸构成二硫??键所组成的，其中包含大环和小环各一个。鱼类生长激素空间结构（图１－３）特??征：（］）ａ－螺旋折叠成４个反向平行螺旋柱；（２）其蛋白的螺旋Ｄ区相对于其??他位置，其氨基酸的保守性更强；（３）疏水氨基酸作为受体结合位点位于ＧＨ??蛋白质内部，对维持蛋白质四级结构中起到关键作用（Ｄｅｖｌｉｎ，１９９３）。??Ｃｉｌ?］?？?２??Ｃ?Ｉ?广?Ｊ?ｌ?／??１＞Ｉ?Ｖ￣￣??ｔ?ｊ．??图１－３生长激素空间结构（引自陈蓓，２００４）??Ｆｉｇ．?１－３?Ｔｈｅ?ｓｐａｔｉａｌ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆ?ＧＨ?（ｆｒｏｍ?Ｃｈｅｎ?Ｂｃｉ，?２００４）??１．２．２鱼类生长激素的合成、分泌以及释放??Ｙａｍａｄａ等（１９９３）在－些鱼类的腺垂体中找到Ｐｉｔ－１，并在ＧＨ的启动子区??域找到能与Ｐｉｔ－１高效的结合位点；而且在另外一些鱼类的启动子区域中也发现??ｃＡＭＰ有生物功能作用（Ｗｏｎｇ，?１９９６；?Ｂｅｒｎａｒｄｉｎｉ，?１９９９）。因而一些学者认为??Ｐｉｔ－１和ｃＡＭＰ能够控制兔类生长激素的合成。??鱼类生长激素分泌是由下丘脑的生长释放激素（ＧＨＲＨ）和生长激素释放抑??制激素（ＳＩＲＨ）共同调控的，ＧＨＲＨ负责正调控而ＳＩＲＨ负责负调控。从１９７０??年以来
【参考文献】：
期刊论文
[1]卵形鲳鲹肉碱棕榈酰基转移酶Ⅰ全长cDNA序列的克隆及生物信息学分析[J]. 方玲玲,王忠良,陈刚,汤保贵,张健东,黄建盛,周晖. 广东海洋大学学报. 2015(03)
[2]美人鱼发光杆菌杀鱼亚种感染卵形鲳鲹的病理学观察[J]. 苏友禄,冯娟,郭志勋,徐力文,王江勇. 海洋科学. 2012(02)
[3]卵形鲳鲹胚后发育阶段鳃的分化和发育[J]. 区又君,何永亮,李加儿. 中国水产科学. 2012(01)
[4]卵形鲳鲹消化系统的胚后发育[J]. 区又君,何永亮,李加儿. 台湾海峡. 2011(04)
[5]卵形鲳鲹幼鱼的赖氨酸需求量[J]. 杜强,林黑着,牛津,丁贤,黄忠,陈旭,陈义方. 动物营养学报. 2011(10)
[6]卵形鲳鲹消化酶活性的研究Ⅳ 养殖水温和酶反应温度对幼鱼酶活性的影响[J]. 区又君,罗奇,李加儿,蔡文超. 海洋渔业. 2011(01)
[7]卵形鲳鲹幼鱼蛋白质需要量的研究[J]. 刘兴旺,许丹,张海涛,梁海鸥. 南方水产科学. 2011(01)
[8]卵形鲳鲹消化酶活性的研究Ⅰ.成鱼和幼鱼消化酶活性在不同消化器官中的分布及其比较[J]. 区又君,罗奇,李加儿,范春燕. 南方水产科学. 2011(01)
[9]卵形鲳鲹消化酶活性的研究ⅢpH对幼鱼和成鱼消化酶活性的影响[J]. 区又君,罗奇,李加儿. 海洋渔业. 2010(04)
[10]卵形鲳鲹线粒体16S rRNA基因全长序列的克隆与分析[J]. 彭金霞,彭敏,陈秀荔,蒋伟明,杨春玲,李咏梅. 水生态学杂志. 2010(04)
本文编号：3127957
本文链接：https://www.wllwen.com/nykjlw/scyylw/3127957.html
