栉孔扇贝（Chlamys farreri）性类固醇激素和17β-羟类固醇脱氢酶8在性腺发育过程中的潜在作用

发布时间：2021-05-07 00:53

　　研究表明性类固醇激素广泛地存在于软体动物中，并在软体动物生殖过程中发挥着潜在的重要作用，但是目前对软体动物内分泌系统的了解还十分有限，而且在软体动物性类固醇激素的来源和功能机制等问题上还存有争议。栉孔扇贝（Chlamys farreri）是一种雌雄异体、性别稳定的双壳贝类，是我国北方重要的经济物种。本研究以栉孔扇贝为研究对象，首先检测了栉孔扇贝年生殖周期性腺中雌二醇和睾酮的含量逐月变化，探讨了性类固醇激素在栉孔扇贝生殖过程中的潜在作用；克隆并鉴定出了17β-羟类固醇脱氢酶8（17β-HSD8）基因，并对其序列特征和体外催化活性进行了分析；进一步，研究分析了17β-HSD8在栉孔扇贝性腺和胚胎、幼虫中的时空表达模式，并探讨了其在性类固醇激素合成代谢途径、配子发生和个体早期发育过程中的潜在作用。为了探讨性类固醇激素在栉孔扇贝生殖过程中的潜在作用，本文通过酶联免疫吸附技术（ELISA）检测并分析了2012年1月到12月期间栉孔扇贝性腺中雌二醇和睾酮含量的变化。根据配子发生和排放过程的组织学特征，我们将栉孔扇贝性腺年生殖周期划分为休止期、增殖期、生长期、成熟期、第一次排放期、恢复期和第二次排放... 

【文章来源】：中国海洋大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：123 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 前言
    1. 脊椎动物类固醇激素简介
    2. 软体动物性类固醇激素研究进展
        2.1 性类固醇激素在软体动物生殖过程中的潜在作用
            2.1.1 性别决定和性别分化
            2.1.2 配子发生
            2.1.3 配子排放
        2.2 性类固醇激素的作用机制
        2.3 软体动物性类固醇激素合成与代谢途径
    3. 17β-羟类固醇脱氢酶
        3.1 哺乳动物 17β-羟类固醇脱氢酶结构与功能
        3.2 低等动物 17β-羟类固醇脱氢酶研究进展
        3.3 17β-羟类固醇脱氢酶 8 研究进展
    4. 研究目的及意义
第二章 性类固醇激素在栉孔扇贝生殖过程中的作用
    1. 材料与方法
        1.1 材料
            1.1.1 实验动物
            1.1.2 实验仪器
            1.1.3 试剂及耗材
        1.2 方法
            1.2.1 性腺组织学观察
            1.2.2 性腺性类固醇激素水平检测
            1.2.3 数据统计分析
    2. 结果
        2.1 水温变化
        2.2 性腺指数变化
        2.3 性腺发育和配子发生组织学特征
        2.4 性腺发育阶段频率分布
        2.5 性腺激素水平变化
        2.6 睾酮/雌二醇（T/E2）比值变化
        2.7 性腺激素水平与配子发生过程的相关性
    3. 讨论
        3.1 配子发生特征及性腺分期
        3.2 性激素在生殖过程中的潜在作用
            3.2.1 激素水平的性别二态性
            3.2.2 在性别决定和性别分化过程中的作用
            3.2.3 在配子发生过程中的潜在作用
            3.2.4 在配子排放过程中的潜在作用
            3.2.5 潜在的芳香化酶活性
    4. 小结
第三章 栉孔扇贝 17β-羟类固醇脱氢酶 8 克隆及序列特征
    1. 材料方法
        1.1 材料
            1.1.1 实验动物
            1.1.2 实验仪器
            1.1.3 试剂及耗材
        1.2 方法
            1.2.1 总 RNA 提取
            1.2.2 RACE-ready cDNA 第一链合成
            1.2.3 全长 cDNA 克隆
            1.2.4 生物信息学分析
            1.2.5 重组蛋白的原核表达、纯化及复性
            1.2.6 重组蛋白体外酶活性测定
    2. 结果
        2.1 17β-HSD8 全长 cDNA 及其序列特征
        2.2 17β-HSD8 多序列比对及系统进化分析
        2.3 17β-HSD8 蛋白生物信息学分析
        2.4 17β-HSD8 重组蛋白的原核表达、纯化及复性
        2.5 17β-HSD8 重组蛋白体外催化活性
    3. 讨论
        3.1 栉孔扇贝 17β-HSD8 序列特征
        3.2 栉孔扇贝 17β-HSD8 的催化活性
    4. 小结
第四章 栉孔扇贝 17β-羟类固醇脱氢酶 8 的表达及功能分析
    1. 材料方法
        1.1 材料
            1.1.1 实验动物
            1.1.2 实验仪器
            1.1.3 试剂及耗材
        1.2 方法
            1.2.1 总 RNA 提取
            1.2.2 cDNA 第一链合成
            1.2.3 半定量 RT-PCR
            1.2.4 实时荧光定量 PCR（qRT-PCR）
            1.2.5 原位杂交
            1.2.6 Western blot
            1.2.7 免疫组化
            1.2.8 数据统计分析
    2. 结果
        2.1 17β-HSD8 基因 mRNA 组织表达特征
        2.2 栉孔扇贝 17β-HSD8 性腺发育过程中的时间表达特征
            2.2.1 17β-HSD8 mRNA 相对表达量
            2.2.2 17β-HSD8 蛋白表达量
        2.3 栉孔扇贝 17β-HSD8 在性腺中的空间表达特征
            2.3.1 17β-HSD8 mRNA 细胞学定位
            2.3.2 17β-HSD8 蛋白的细胞学定位
        2.4 栉孔扇贝早期发育过程中 17β-HSD8 mRNA 的表达图式
            2.4.1 17β-HSD8 mRNA 相对表达量
            2.4.2 17β-HSD8 mRNA 空间表达
    3. 讨论
        3.1 17β-HSD8 参与调控雌二醇介导的配子发生过程
        3.2 17β-HSD8 在配子发生过程中的生理功能
        3.3 17β-HSD8 在早期发育过程中的潜在作用
        3.4 潜在的 17β-HSD8 转录调控机制
        3.5 17β-HSD8 在脂质代谢途径中的潜在作用
    4. 小结
总结
参考文献
致谢
个人简历
学术成果



本文编号：3172922