皂角苷佐剂对大菱鲆重要免疫基因表达及非特异免疫的影响
发布时间：2021-05-07 17:07
细菌性疾病是威胁水产养殖鱼类健康的主要原因之一。长期以来，采用化学制剂和抗生素类药物治疗鱼病，不仅病原菌耐药性增强，还会使鱼体药物残留而对人类造成间接地伤害。鱼类疾病控制正在向用鱼用疫苗放置方向发展。鱼病的疫苗免疫防治技术是最佳的鱼病防治策略，但鱼类的特殊生活环境，注射和口服免疫接种的方式都不是最优途径，浸泡则成为鱼用疫苗的首选。为了增强浸泡疫苗的免疫保护效果，本研究以前期筛选出的皂角苷为佐剂，以甲醛灭活鳗弧菌疫苗，以大菱鲆为实验鱼类，从鱼类非特异性免疫和特异性免疫两个方面，对皂角苷的佐剂功能进行评价，以期从分子水平上阐明皂角苷佐剂的免疫机理。第一部分，以不同浓度的皂角苷（15mg/L、35mg/L）为佐剂，用灭活鳗弧菌为浸泡疫苗免疫大菱鲆，采用腹腔注射为阳性对照组，对免疫后不同时间段内各主要免疫器官（皮肤、鳃、头肾、脾脏和肠组织）中各主要免疫相关基因的表达量进行了定量分析。结果表明，在两组皂角苷佐剂联合浸泡疫苗组的大菱鲆的鳃组织中，MHCⅡα基因在浸泡的48h内，即表现出显著的表达，相对表达量分别为136.3和378.5，1d后表达量迅速降低。高浓度的皂角苷组及...
【文章来源】：中国海洋大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 文献综述
1.1 大菱鲆（Scophthalmus maximus）
1.2 鱼类的免疫器官
1.2.1 胸腺
1.2.2 头肾
1.2.3 脾
1.2.4 黏膜相关淋巴组织(MALT)
1.3 鱼类的免疫应答
1.4 非特异性免疫相关指标
1.4.1 溶菌酶
1.4.2 碱性磷酸酶
1.4.3 吞噬作用
1.4.4 补体
1.5 特异性免疫相关细胞因子
1.5.1 主要组织相容性复合体(MHC)
1.5.2 白介素 1（IL-1）
1.5.3 TNF-α
1.6 鱼类疫苗
1.7 免疫佐剂
1.7.1 佐剂的作用原理
1.7.2 免疫佐剂的分类
1.7.3 影响佐剂效果的的因素
1.8 皂角苷
第二章 皂角苷对大菱鲆重要免疫基因表达的影响
2.1 前言
2.2 材料方法
2.2.1 大菱鲆和皂角苷
2.2.2 鳗弧菌疫苗制备
2.2.3 分组、免疫和取样
2.2.4 RNA 提取和 cDNA 的合成
2.2.5 qPCR 检测各个基因的表达
2.2.6 数据分析
2.3 结果
2.3.1 总 RNA 提取及检测
2.3.2 大菱鲆β-actin 基因、MHCⅡα基因、IL-1β基因、TNF-α基因Real-TimePCR 中溶解曲线分析
2.3.3 MHCⅡα基因在各个组织中的表达
2.3.4 IL-1β基因的表达分析
2.3.5 TNF-α在组织中的表达
2.3.6 大菱鲆不同部位的皮肤中三种基因表达分析
2.4 讨论
第三章 皂角苷对大菱鲆非特异性免疫的影响
3.1 前言
3.2 材料与方法
3.2.1 实验材料
3.2.2 实验分组
3.2.3 样品的提取和制备
3.2.4 白细胞吞噬活力
3.2.5 补体旁路途径溶血活性（ACH50）
3.2.6 溶菌酶活力
3.2.7 抑菌活力测定
3.2.8 AKP 活力
3.2.9 血清总蛋白浓度的测定
3.2.10 数据分析
3.3 结果
3.3.1 皂角苷对白细胞吞噬活力的影响
3.3.2 血清补体旁路途径溶血活性
3.3.3 血清及黏液中溶菌酶活力
3.3.4 抑菌活力测定
3.3.5 AKP 活力
3.3.6 血清总蛋白含量
3.4 讨论
参考文献
致谢
个人简历
攻读学位期间科研成果
【参考文献】：
期刊论文
[1]皂角苷对大菱鲆血细胞的溶血作用[J]. 王玉娟,王秀华,韩雯,王锐,黄倢. 水产学报. 2013(07)
[2]饲料中维生素C对七彩神仙鱼仔幼鱼非特异性免疫的影响[J]. 廖畅宇,邵力,王旭霞. 渔业科学进展. 2012(03)
[3]人参皂甙Rg1对体外人胃癌细胞增殖的抑制作用及机制[J]. 商义,张才全. 中国细胞生物学学报. 2011(03)
[4]黄芪对半滑舌鳎非特异免疫活性的影响[J]. 刘金海,王宏志,王文阳. 饲料工业. 2011(02)
[5]鱼类抗病毒非特异性免疫机制研究进展[J]. 王亚楠,孔晓瑜,史成银. 动物医学进展. 2008(05)
[6]肽聚糖对鲫鱼嗜水气单胞菌灭活疫苗免疫增强效果的研究[J]. 郭玉娟,陈学年. 中国兽医科学. 2006(01)
[7]免疫佐剂作用机理的研究进展[J]. 孙红祥,潘杭君. 中国兽药杂志. 2005(10)
[8]ISCOMATRIXTM佐剂:细胞和体液免疫应答的有效诱导剂[J]. 王斌,徐苗. 国外医学(预防、诊断、治疗用生物制品分册). 2005(05)
[9]饲料中添加杜仲提取物养殖奥尼鱼的试验[J]. 姚红梅,肖克宇,钟蕾. 淡水渔业. 2005(02)
[10]鲫鱼对不同剂量α-甘露聚糖肽免疫应答的研究[J]. 王高学,徐翔. 黑龙江畜牧兽医. 2005(03)
硕士论文
[1]两种佐剂对大菱鲆鳗弧菌浸泡疫苗免疫效果的影响[D]. 王玉娟.上海海洋大学 2012
本文编号：3173763
【文章来源】：中国海洋大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 文献综述
1.1 大菱鲆（Scophthalmus maximus）
1.2 鱼类的免疫器官
1.2.1 胸腺
1.2.2 头肾
1.2.3 脾
1.2.4 黏膜相关淋巴组织(MALT)
1.3 鱼类的免疫应答
1.4 非特异性免疫相关指标
1.4.1 溶菌酶
1.4.2 碱性磷酸酶
1.4.3 吞噬作用
1.4.4 补体
1.5 特异性免疫相关细胞因子
1.5.1 主要组织相容性复合体(MHC)
1.5.2 白介素 1（IL-1）
1.5.3 TNF-α
1.6 鱼类疫苗
1.7 免疫佐剂
1.7.1 佐剂的作用原理
1.7.2 免疫佐剂的分类
1.7.3 影响佐剂效果的的因素
1.8 皂角苷
第二章 皂角苷对大菱鲆重要免疫基因表达的影响
2.1 前言
2.2 材料方法
2.2.1 大菱鲆和皂角苷
2.2.2 鳗弧菌疫苗制备
2.2.3 分组、免疫和取样
2.2.4 RNA 提取和 cDNA 的合成
2.2.5 qPCR 检测各个基因的表达
2.2.6 数据分析
2.3 结果
2.3.1 总 RNA 提取及检测
2.3.2 大菱鲆β-actin 基因、MHCⅡα基因、IL-1β基因、TNF-α基因Real-TimePCR 中溶解曲线分析
2.3.3 MHCⅡα基因在各个组织中的表达
2.3.4 IL-1β基因的表达分析
2.3.5 TNF-α在组织中的表达
2.3.6 大菱鲆不同部位的皮肤中三种基因表达分析
2.4 讨论
第三章 皂角苷对大菱鲆非特异性免疫的影响
3.1 前言
3.2 材料与方法
3.2.1 实验材料
3.2.2 实验分组
3.2.3 样品的提取和制备
3.2.4 白细胞吞噬活力
3.2.5 补体旁路途径溶血活性（ACH50）
3.2.6 溶菌酶活力
3.2.7 抑菌活力测定
3.2.8 AKP 活力
3.2.9 血清总蛋白浓度的测定
3.2.10 数据分析
3.3 结果
3.3.1 皂角苷对白细胞吞噬活力的影响
3.3.2 血清补体旁路途径溶血活性
3.3.3 血清及黏液中溶菌酶活力
3.3.4 抑菌活力测定
3.3.5 AKP 活力
3.3.6 血清总蛋白含量
3.4 讨论
参考文献
致谢
个人简历
攻读学位期间科研成果
【参考文献】：
期刊论文
[1]皂角苷对大菱鲆血细胞的溶血作用[J]. 王玉娟,王秀华,韩雯,王锐,黄倢. 水产学报. 2013(07)
[2]饲料中维生素C对七彩神仙鱼仔幼鱼非特异性免疫的影响[J]. 廖畅宇,邵力,王旭霞. 渔业科学进展. 2012(03)
[3]人参皂甙Rg1对体外人胃癌细胞增殖的抑制作用及机制[J]. 商义,张才全. 中国细胞生物学学报. 2011(03)
[4]黄芪对半滑舌鳎非特异免疫活性的影响[J]. 刘金海,王宏志,王文阳. 饲料工业. 2011(02)
[5]鱼类抗病毒非特异性免疫机制研究进展[J]. 王亚楠,孔晓瑜,史成银. 动物医学进展. 2008(05)
[6]肽聚糖对鲫鱼嗜水气单胞菌灭活疫苗免疫增强效果的研究[J]. 郭玉娟,陈学年. 中国兽医科学. 2006(01)
[7]免疫佐剂作用机理的研究进展[J]. 孙红祥,潘杭君. 中国兽药杂志. 2005(10)
[8]ISCOMATRIXTM佐剂:细胞和体液免疫应答的有效诱导剂[J]. 王斌,徐苗. 国外医学(预防、诊断、治疗用生物制品分册). 2005(05)
[9]饲料中添加杜仲提取物养殖奥尼鱼的试验[J]. 姚红梅,肖克宇,钟蕾. 淡水渔业. 2005(02)
[10]鲫鱼对不同剂量α-甘露聚糖肽免疫应答的研究[J]. 王高学,徐翔. 黑龙江畜牧兽医. 2005(03)
硕士论文
[1]两种佐剂对大菱鲆鳗弧菌浸泡疫苗免疫效果的影响[D]. 王玉娟.上海海洋大学 2012
本文编号：3173763
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