高温下调雌二醇在尼罗罗非鱼基因—温度性别决定中的作用及机制研究
发布时间：2021-05-18 14:31
鱼类性别决定具有高度可塑性,性别决定与分化由遗传和环境因素共同决定。在环境因素中,温度变化能够在部分鱼类的性别分化期影响其性腺分化的命运,改变群体性比。同时,在这一时期,硬骨鱼类在卵巢中合成内源性雌激素,并作为卵巢分化的自然引导者。众多研究表明,内源性类固醇激素的变化,甚至可以掩盖遗传因素,改变性腺分化的方向。尼罗罗非鱼是一种性别分化方向受到基因和温度双重影响的鱼类,即在性别分化期,温度能够改变其性别分化的方向,而温度是如何影响其性别分化的,即高温条件下内源雌激素是否通过其水平变化驱动这种分化方向的改变?雌激素的变化水平又如何,具体的分子机制是什么,目前仍不清楚。本研究通过野生雌鱼（XX）与伪雄鱼（XX）杂交,获取了三个尼罗罗非鱼全雌家系。因为Letrozole能特异降低E2的水平,所以为了探究在罗非鱼性腺分化早期,高温处理对性类固醇激素水平与群体雄性率的影响,以及二者的对应关系,分别设置雌鱼对照组,雄鱼对照组,高温36℃处理组（XX+HT）和不同浓度Letrozole处理组,对比分析高温和Letrozole在性别分化早期下调E2水平的能力。结果显示,虽然在高温处理早期（13dpf）罗...
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：75 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
符号说明
中文摘要
Abstract
1 前言
1.1 脊椎动物的性别决定机制
1.1.1 遗传性别决定机制
1.1.2 温度性别决定机制
1.1.3 基因-温度性别决定
1.2 温度对鱼类性别决定与分化的影响
1.3 性类固醇激素对鱼类性别决定与分化的影响
1.4 鱼类性别逆转研究现状
1.5 尼罗罗非鱼简述
1.5.1 尼罗罗非鱼的性别决定机制
1.5.2 温度对尼罗罗非鱼性别决定与分化的影响
1.5.3 外源性激素与芳香化酶抑制剂对尼罗罗非鱼性别决定与分化的影响
1.6 尼罗罗非鱼性腺细胞的分化
1.7 参与尼罗罗非鱼性别决定与分化的关键基因
1.7.1 芳香化酶基因
1.7.2 Dmrt1 基因
1.8 本研究的目的与意义
2 材料与方法
2.1 试验材料
2.1.1 尼罗罗非鱼家系的建立
2.1.2 实验设计
2.1.3 实验仪器与试剂
2.1.4 主要试剂及耗材
2.1.5 所用试剂的配制
2.1.6 主要数据库及软件
2.2 试验方法
2.2.1 尼罗罗非鱼性腺总RNA的提取
2.2.2 RNA检测及定量
2.2.3 qRT-PCR检测Cyp19a1a和 Dmrt1 的表达量
2.2.4 通过性连锁分子标记筛选遗传雄鱼(XY)
2.2.5 性类固醇激素水平检测
2.2.8 石蜡切片的制作及HE染色
2.2.9 原位杂交检测性腺组织Cyp19a1a和 Dmrt1的mRNA表达
2.2.10 免疫组化检测性腺组织Cyp19a1a和 Dmrt1 的蛋白表达
2.2.11 Western Blot
2.2.12 亚硫酸氢盐测序
2.2.13 统计分析
3 结果与分析
3.1 正常雄鱼的鉴定
3.2 高温处理及各处理家系性逆转率的确定
3.3 高温和Letrozole处理对罗非鱼性腺内性激素水平和雄性率的差异比较分析
3.4 高温处理对Cyp19a1a mRNA和蛋白表达水平的影响
3.5 高温处理对尼罗罗非鱼性腺内芳香化酶活性的影响
3.6 高温处理对尼罗罗非鱼Cyp19a1a启动子区甲基化水平的影响
3.7 高温处理对Dmrt1 mRNA和蛋白表达水平的影响
4 讨论
4.1 高温和Letrozole处理对罗非鱼性腺内性激素水平与雄性率的差异比较分析
4.2 高温处理对尼罗罗非鱼性腺中Cyp19a1a蛋白表达水平和芳香化酶活性的影响
4.3 高温处理对尼罗罗非鱼Cyp19a1a启动子区甲基化水平和mRNA表达水平的影响
4.4 高温处理对尼罗罗非鱼Dmrt1 mRNA和蛋白表达水平的影响
5 结论
参考文献
致谢
攻读硕士期间发表论文
【参考文献】：
期刊论文
[1]脊椎动物性别决定和分化的分子机制研究进展[J]. 周林燕,张修月,王德寿. 动物学研究. 2004(01)
本文编号：3193958
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：75 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
符号说明
中文摘要
Abstract
1 前言
1.1 脊椎动物的性别决定机制
1.1.1 遗传性别决定机制
1.1.2 温度性别决定机制
1.1.3 基因-温度性别决定
1.2 温度对鱼类性别决定与分化的影响
1.3 性类固醇激素对鱼类性别决定与分化的影响
1.4 鱼类性别逆转研究现状
1.5 尼罗罗非鱼简述
1.5.1 尼罗罗非鱼的性别决定机制
1.5.2 温度对尼罗罗非鱼性别决定与分化的影响
1.5.3 外源性激素与芳香化酶抑制剂对尼罗罗非鱼性别决定与分化的影响
1.6 尼罗罗非鱼性腺细胞的分化
1.7 参与尼罗罗非鱼性别决定与分化的关键基因
1.7.1 芳香化酶基因
1.7.2 Dmrt1 基因
1.8 本研究的目的与意义
2 材料与方法
2.1 试验材料
2.1.1 尼罗罗非鱼家系的建立
2.1.2 实验设计
2.1.3 实验仪器与试剂
2.1.4 主要试剂及耗材
2.1.5 所用试剂的配制
2.1.6 主要数据库及软件
2.2 试验方法
2.2.1 尼罗罗非鱼性腺总RNA的提取
2.2.2 RNA检测及定量
2.2.3 qRT-PCR检测Cyp19a1a和 Dmrt1 的表达量
2.2.4 通过性连锁分子标记筛选遗传雄鱼(XY)
2.2.5 性类固醇激素水平检测
2.2.8 石蜡切片的制作及HE染色
2.2.9 原位杂交检测性腺组织Cyp19a1a和 Dmrt1的mRNA表达
2.2.10 免疫组化检测性腺组织Cyp19a1a和 Dmrt1 的蛋白表达
2.2.11 Western Blot
2.2.12 亚硫酸氢盐测序
2.2.13 统计分析
3 结果与分析
3.1 正常雄鱼的鉴定
3.2 高温处理及各处理家系性逆转率的确定
3.3 高温和Letrozole处理对罗非鱼性腺内性激素水平和雄性率的差异比较分析
3.4 高温处理对Cyp19a1a mRNA和蛋白表达水平的影响
3.5 高温处理对尼罗罗非鱼性腺内芳香化酶活性的影响
3.6 高温处理对尼罗罗非鱼Cyp19a1a启动子区甲基化水平的影响
3.7 高温处理对Dmrt1 mRNA和蛋白表达水平的影响
4 讨论
4.1 高温和Letrozole处理对罗非鱼性腺内性激素水平与雄性率的差异比较分析
4.2 高温处理对尼罗罗非鱼性腺中Cyp19a1a蛋白表达水平和芳香化酶活性的影响
4.3 高温处理对尼罗罗非鱼Cyp19a1a启动子区甲基化水平和mRNA表达水平的影响
4.4 高温处理对尼罗罗非鱼Dmrt1 mRNA和蛋白表达水平的影响
5 结论
参考文献
致谢
攻读硕士期间发表论文
【参考文献】：
期刊论文
[1]脊椎动物性别决定和分化的分子机制研究进展[J]. 周林燕,张修月,王德寿. 动物学研究. 2004(01)
本文编号：3193958
本文链接：https://www.wllwen.com/nykjlw/scyylw/3193958.html
